運城鹽湖多功能中度嗜鹽菌的分離篩選及發(fā)酵條件優(yōu)化.pdf

1、山西運城鹽湖是一個富含芒硝、鹽的特殊水體，因而土壤鹽堿化嚴(yán)重。國內(nèi)外學(xué)者對其微生物的研究相對較少。本實驗對運城鹽湖土壤中的產(chǎn)功能酶耐鹽細(xì)菌進行分離鑒定，了解了該地區(qū)耐鹽菌的產(chǎn)功能酶種類和特性。結(jié)合耐鹽功能菌的一些生理生化特性，選用了不同功能酶篩選培養(yǎng)基，并在菌種篩選過程中不斷優(yōu)化實驗條件，通過在培養(yǎng)基中加入酶特異性底物而有針對性的對產(chǎn)不同功能酶的菌株進行富集培養(yǎng)和分離篩選，同時對酶活性較高的菌株產(chǎn)酶發(fā)酵條件進行優(yōu)化，以期為中度嗜鹽菌產(chǎn)酶

2、提供一定的理論依據(jù)。本文主要研究結(jié)果如下：
　?。?）實驗共分離得到了20株產(chǎn)酶細(xì)菌，其中產(chǎn)淀粉酶的菌株有7株，產(chǎn)脂肪酶的菌株有4株，產(chǎn)蛋白酶的菌株有9株。其中產(chǎn)酶活性較高的菌株編號為YH-7、YH-8、YH6-1。之后將此3株菌分別經(jīng)點接法接種到淀粉酶篩選培養(yǎng)基和脂肪酶篩選培養(yǎng)基中進行檢測，發(fā)現(xiàn)菌株YH6-1也同時具有生產(chǎn)淀粉酶和脂肪酶的能力，是一株功能比較多的菌株。對這3株產(chǎn)酶活性較高的菌株進行形態(tài)學(xué)指標(biāo)，生理生化指標(biāo)及16S

3、 rDNA分子序列鑒定，結(jié)果顯示：菌株YH-7（登錄號：KU363164）與Bacillus sonorensis NB RC101234T（登錄號：AYTN010000）的相似度高達99.85％，將該菌命名為Bacillus sp.YH-7；菌株YH-8（登錄號：KU363162）則與Zhihengliuella halotolerans YIM70185T（登錄號：DQ372937）的相似性最高（99.91%），將該菌命名為Zhih

4、engliuella sp.YH-8；而菌株YH6-1則與Bacillus flexus IFO15715T（登錄號：AB021185）的相似度最高（99.93%），則將該菌株命名為Bacillus sp.YH6-1；
　?。?）通過對菌株Bacillus sp.YH6-1的研究發(fā)現(xiàn)，該菌株同時產(chǎn)生蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶。以該菌（YH6-1）做為研究對象，發(fā)現(xiàn)它可以在0.5%-13%的氯化鈉濃度范圍下進行生長，其蛋白酶活力在0.5

5、%氯化鈉時，最高為3726.732 U/ml；在13%氯化鈉時仍有一定的酶活力，活力值1471.765 U/ml約為0.5%氯化鈉時的39.5%。
　　（3）對菌株Bacillus sp.YH6-1的產(chǎn)淀粉酶能力進行單因素分析。結(jié)果表明：菌株Bacillus sp.YH6-1產(chǎn)淀粉酶條件是接種量達到8%時，酶活力基本達到最高，達到了29.133 U/ml；溫度是在30℃時酶活力基本達到最高值28.05 U/ml；pH達到8.5時，

6、菌體產(chǎn)淀粉酶的能力最高；
　?。?）對菌株Bacillus sp.YH6-1的產(chǎn)脂肪酶能力進行單因素分析。結(jié)果表明：菌株Bacillus sp.YH6-1產(chǎn)脂肪酶條件是接種量達到8%時，酶活力基本達到最高，達到了4.09 U/ml；溫度是在35℃時酶活力基本達到最高值4.56 U/ml；pH達到7.5時，菌體產(chǎn)脂肪酶的能力最高值3.83 U/ml；
　?。?）對菌株Bacillus sp.YH6-1的產(chǎn)蛋白酶能力進行單因素分

7、析。結(jié)果表明：菌株Bacillus sp.YH6-1產(chǎn)蛋白酶條件是接種量達到10%時，酶活力基本達到最高，達到了3330.624 U/ml；溫度是在35℃時，酶活力基本達到最高值3413.354 U/ml；pH達到8.5時，菌體產(chǎn)蛋白酶的能力最高值3996.49 U/ml；
　?。?）研究了碳源、氮源和無機鹽離子對菌株Bacillus sp.YH6-1產(chǎn)蛋白酶能力的影響，結(jié)果表明使用牛肉膏為碳源時蛋白酶活力最高，可達到3469.2