2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  通過體內實驗和體外實驗,探討特發(fā)性肺間質纖維化(IPF)病程中,Ac-SDKP通過抑制內質網應激進而干預上皮-間質轉化過程而延緩肺纖維化發(fā)展的作用機制。
  方法:
  體內實驗:將24只健康雄性C57BL/6小鼠(體重25±2g)隨機分為3組:假手術對照組(N組,n=8只)、肺纖維化模型組(M組,n=8只)、肺纖維化+Ac-SDKP干預治療組(P組,n=8只)。M組及P組小鼠采用氣管內注入博來霉素(5 m

2、g/kg,共配制成50μl混合溶液)法制備小鼠肺纖維化模型,21天后于P組小鼠腹腔內埋入Ac-SDKP藥物微量釋放泵(內含Ac-SDKP混合溶液:Ac-SDKP800 ug.kg-1.d-1,冰乙酸0.1 M,卡托普利100 mg.kg-1.d-1,溶液配制劑量經查詢大量國內外文獻而定),持續(xù)干預21天。N組造模方法同M組,氣管內注入等體積(50μl)0.9%氯化鈉生理鹽水。N組和M組小鼠于造模完成后第21天處死,而P組小鼠于Ac-SD

3、KP干預治療后第21天處死,取肺組織,染色并觀察其病理學變化;羥脯氨酸含量測定,判斷肺纖維化模型制備是否成功并評估肺組織纖維化嚴重程度;Western Blot、免疫組化法檢測內質網應激相關蛋白GRP78、CHOP,間質組織標志物Vimentin,上皮組織標志物E-cadherin蛋白水平表達的變化。
  體外實驗:體外培養(yǎng)人Ⅱ型肺泡上皮細胞株(A549細胞),并于無血清同步化處理24小時后給予TGF-β干預24小時,模擬體外肺纖

4、維化病理改變及EMT相關細胞形態(tài)學變化,并于給予Ac-SDKP(80 mmol/L)干預24小時后收集細胞,細胞分組如下:正常對照組(N組)、TGF-β干預組(T組)、TGF-β+Ac-SDKP干預組(T+A組)、單獨Ac-SDKP干預組(A組)。使用倒置相差顯微鏡觀察各組細胞形態(tài)學變化并拍照,qRT-PCR檢測各組細胞中GRP78、CHOP、Vimentin、E-cadherin等指標mRNA水平表達的變化。
  結果:

5、  體內實驗:1、肉眼觀察:N組小鼠肺組織呈淡粉色,表面及切面光滑,未見結節(jié)形成及明顯出血點;M組小鼠雙肺色澤晦暗,表面及切面均可見散在小結節(jié)及大小不等出血點;P組小鼠肺組織表面亦可見上述異常表現(xiàn),但較M組小鼠變化為輕。2、HE及Masson染色:M組小鼠肺組織出現(xiàn)明顯纖維化改變。與M組相比,P組小鼠肺纖維化程度有所減輕,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。3、羥脯氨酸含量測定(HYP):M組小鼠肺組織HYP含量較N組明顯升高;P組較M組

6、降低,而較N組仍有所升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。4、免疫組化結果:(1)N組小鼠肺組織中,E-cadherin表達部位及表達量較多,M組較N組表達明顯減少,P組E-cadherin陽性表達量居于N組與M組之間,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);(2)N組小鼠肺組織中,Vimentin僅少量陽性表達且表達范圍較小,而M組中,Vimentin的表達量較N組明顯增加且廣泛表達于肺泡細胞胞漿及肺組織間質基質中,P組Vimentin陽

7、性表達量居于N組與M組之間,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);(3)CHOP及GRP78廣泛表達于支氣管上皮細胞、肺泡上皮細胞及血管內皮細胞,且M組表達量均高于N組,而P組表達量則介于N組與M組之間(P<0.05)。5、Western Blot結果:與N組比較, M組CHOP、GRP78、Vimentin表達量均升高;E-cadherin的表達量降低;而P組各指標蛋白陽性表達量均介于N組與M組之間,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。<

8、br>  體外實驗:1、A549細胞形態(tài)學變化:經 TGF-β干預后,細胞呈紡錘樣、成纖維細胞樣形態(tài)改變。2、qRT-PCR結果:與N組比較,M組CHOP、GRP78、Vimentin mRNA表達量均升高,E-cadherin mRNA的表達量降低,而P組各指標mRNA表達量均介于N組與M組之間,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
  結論:
  在肺間質纖維化發(fā)病過程中,Ac-SDKP可能通過抑制內質網應激(ERS)減

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