峨?yún)?nèi)酯衍生物抗腫瘤活性研究.pdf

1、目的：設(shè)計(jì)并合成峨?yún)?nèi)酯4'位結(jié)構(gòu)改造的衍生物，以期達(dá)到減毒增效的作用;探究合成出的一系列峨?yún)?nèi)酯衍生物對(duì)多種人源腫瘤細(xì)胞的體外增殖抑制活性;探究衍生物對(duì)SNU-387、HT-29細(xì)胞凋亡的影響;探究衍生物對(duì)多種人源腫瘤細(xì)胞Bax、Bcl-2基因表達(dá)的影響。
　　方法：脫除峨?yún)?nèi)酯4'位甲基得到含有活性羥基的4'-去甲峨?yún)?nèi)酯，再與肉桂酸、3-苯丙酸、對(duì)硝基苯甲酸等配體進(jìn)行酯化反應(yīng)得到相關(guān)衍生物;通過(guò)MTT法觀察濃度梯度為0、1.

2、5、3、6、12.5、25、50、100ug/mL的四種衍生物體外抑制HepG2、SNU-387、HT-29、MG-63、MCF-7細(xì)胞增殖的作用，50ug/mL的順鉑作為陽(yáng)性組;采用AnnexinⅤ-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒，濃度為1、40、80ug/mL的四種衍生物作為加藥組，濃度為10、40μg/mL的順鉑作為陽(yáng)性組，0.1％DMSO作為空白組，通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組藥物作用SNU-387和HT-29細(xì)胞48h后對(duì)細(xì)胞凋亡

3、的影響;將50ug/mL的四種衍生物設(shè)為加藥組，50ug/mL的順鉑設(shè)為陽(yáng)性組，0.1％DMSO設(shè)為空白組，通過(guò)ELISA試劑盒檢測(cè)各組作用于MCF-7、HepG2、HT-29、MG-63腫瘤細(xì)胞48h后，對(duì)Bax、Bcl-2基因表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：(1)成功得到5個(gè)峨?yún)?nèi)酯衍生物，分別是4'-去甲基-4'-氧-環(huán)丁甲酰基-去氧鬼臼毒素（環(huán)丁甲酸衍生物），4'-去甲基-4'-氧-(3-苯基-2-烯丙?；?-去氧鬼臼毒素（肉桂酸

4、衍生物），4'-去甲基-4'-氧-(3-苯基-丙?；?-去氧鬼臼毒素（3-苯丙酸衍生物），4'-去甲基-4'-氧-對(duì)硝基苯甲?；?去氧鬼臼毒素（對(duì)硝基苯甲酸衍生物），4'-去甲基-4'-氧-對(duì)甲基苯甲?；?去氧鬼臼毒素（對(duì)甲基苯甲酸衍生物），通過(guò)1H-NMR確認(rèn)其結(jié)構(gòu)。
　　(2)環(huán)丁甲酸衍生物、肉桂酸衍生物、3-苯丙酸衍生物、對(duì)硝基苯甲酸衍生物對(duì)所選的腫瘤細(xì)胞均表現(xiàn)出抑制體外增殖的活性，各細(xì)胞抑制效果最好的衍生物的IC50值如下

5、:環(huán)丁甲酸衍生物對(duì)SNU-387細(xì)胞為4.346μg/mL，對(duì)MCF-7細(xì)胞為7.201μg/mL，3-苯丙酸衍生物對(duì)HT-29細(xì)胞為6.218μg/mL，對(duì)硝基苯甲酸衍生物對(duì)HepG2細(xì)胞為9.894μg/mL，對(duì)MG-63細(xì)胞為8.982μg/mL，濃度為100ug/mL時(shí)，各組最高抑制率均達(dá)到或接近80％，顯示出良好的體外抗腫瘤活性，且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。但肉桂酸衍生物、3-苯丙酸衍生物對(duì)MG-63細(xì)胞，3-苯丙酸衍生物對(duì)MCF

6、-7細(xì)胞的增殖抑制效果較差。
　　(3)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡的結(jié)果顯示，加藥組與空白組相比兩種細(xì)胞的散點(diǎn)均向右移動(dòng)，提示細(xì)胞凋亡的發(fā)生。對(duì)SNU-387細(xì)胞，AnnexinⅤ+/PI+區(qū)域所表示的晚期凋亡細(xì)胞數(shù)隨衍生物濃度增加呈明顯上升趨勢(shì)，與濃度成正相關(guān);對(duì)HT-29細(xì)胞，環(huán)丁甲酸衍生物濃度的增加，早期凋亡、晚期凋亡細(xì)胞數(shù)均明顯增加，而其他三種衍生物雖引起凋亡，但凋亡率與衍生物濃度相關(guān)的程度不高。
　　(4)ELISA試

7、劑盒檢測(cè)結(jié)果顯示，肉桂酸衍生物、3-苯丙酸衍生物、對(duì)硝基苯甲酸衍生物、環(huán)丁甲酸衍生物作用于MCF-7、HepG2、HT-29、MG-63細(xì)胞后，與空白組相比各加藥組Bcl-2/Bax值均降低。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)t-test檢驗(yàn)，除肉桂酸衍生物對(duì)MCF-7、MG-63細(xì)胞以及對(duì)硝基苯甲酸衍生物對(duì)MCF-7細(xì)胞外，其余各組比值與空白組相比均有顯著性差異（*P＜0.05）。3-苯丙酸衍生物對(duì)MG-63細(xì)胞，對(duì)硝基苯甲酸衍生物、環(huán)丁甲酸衍生物對(duì)HepG2