綿羊轉FST基因骨骼肌細胞系的建立及其對發(fā)育相關基因的影響.pdf

1、分類號UDC學校代碼!Q12魚密級編號學號3Q窆Q8Q量量論文題目研究生：量整堡指導教師：僉明副班窒員專業(yè)：動物堂研究方向：生殖生物堂壁生物撞苤學院：生金科堂堂隨二。一二年五月內(nèi)蒙古大學碩士學位論文綿羊轉FST基因骨骼肌細胞系的建立及其對發(fā)育相關基因的影響摘要卵泡抑制素(follistatin，F(xiàn)ST)是一種單鏈糖蛋白，是從卵泡液中分離獲得的，也稱為性激素抑制蛋白。FST具有多種生物學功能，其中FST能與肌肉抑制素(MSTN)結合形成二

2、聚體，抑制MSTN與受體結合，從而調(diào)節(jié)肌肉的生長發(fā)育。為了研究FST基因對家畜骨骼肌細胞生長發(fā)育的作用機制，本研究在骨骼肌細胞中特異性高表達FST基因，探討FST過表達對綿羊肌源性細胞生長發(fā)育和相關基因表達的影響。我們首先利用脂質(zhì)體介導的方法分別將骨骼肌特異表達FST的真核表達載體PCFCDs—red和PSPFCDs—red轉染到骨骼肌衛(wèi)星細胞和肌管細胞中，獲得特異表達目的基因的轉基因細胞系，然后分析轉基因細胞的生長狀況，并通過流式細胞

3、檢測、實時定量PCR及蛋白免疫印記等方法研究目的基因及其相關基因的表達水平，從而獲得高效穩(wěn)定的轉基因細胞系，為制備轉基因動物提供細胞模型。1骨骼肌特異表達載體轉染綿羊骨骼肌衛(wèi)星細胞并誘導為成肌細胞利用脂質(zhì)體介導的方法將骨骼肌特異性載體轉染到綿羊骨骼肌衛(wèi)星細胞，通過G418和紅色熒光蛋白雙篩選獲得轉基因細胞陽性克隆。擴大培養(yǎng)轉基因細胞，通過體外誘導培養(yǎng)獲得轉基因肌管細胞。選取陽性轉基因肌衛(wèi)星細胞和肌管細胞繪制生長曲線并對轉基因陽性細胞的細