人結(jié)腸癌耐藥細(xì)胞系的建立及其耐藥相關(guān)基因的研究.pdf

1、目的： 腫瘤病人對(duì)藥物的耐受是臨床上令人十分棘手的問題，迫切需要建立一種能夠預(yù)測(cè)病人個(gè)體對(duì)化療藥物療效的檢測(cè)方法。本研究利用基因芯片技術(shù)篩選結(jié)腸癌細(xì)胞中草酸鉑耐藥與敏感相關(guān)的基因，為結(jié)腸癌草酸鉑耐藥分子機(jī)制的研究提供新的線索，并為臨床提供預(yù)測(cè)個(gè)體化化療敏感性的分子標(biāo)記。 方法： 利用MTT方法檢測(cè)人結(jié)腸癌細(xì)胞系THC8307對(duì)5-FU和L-OHP的敏感性。將THC8307持續(xù)培養(yǎng)在含L-OHP的培養(yǎng)基中，藥物濃度

2、從0．108μg/ml開始，經(jīng)過12個(gè)逐漸遞增的藥物濃度，在終濃度為6μg/ml的培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)4個(gè)月后，分析細(xì)胞增殖和藥物毒性的差異。進(jìn)一步用寡核苷酸芯片分析親代細(xì)胞THC8307和耐藥細(xì)胞THC8307/L-OHP基因表達(dá)譜的差異，部分表達(dá)差異的基因進(jìn)一步用半定量RT-PCR進(jìn)行驗(yàn)證。 結(jié)果： 1、THC8307細(xì)胞對(duì)L-OHP和5-FU表現(xiàn)出較高的敏感性。草酸鉑對(duì)細(xì)胞的IC50值為5．334±0．57μg/ml（

3、小于1PPC），5-FU對(duì)細(xì)胞的IC50值為32．200±26．20μg/ml（大于1PPC）。 2、穩(wěn)定的耐藥細(xì)胞模型THC8307/L-OHP與親代細(xì)胞THC8307對(duì)L-OHP的敏感性不同，具有顯著性差異（P<0．01），同時(shí)THC8307/L-OHP對(duì)5-FU有一定的交叉耐藥。L-OHP對(duì)THC8307/L-OHP的IC50值為172．92±54．48μg/ml，耐藥性是親代細(xì)胞的30．99倍，5-FU對(duì)細(xì)胞的IC50值

4、為215．60±6．96μg/ml，耐藥性是親代細(xì)胞的6．70倍。 3、寡核苷酸芯片分析THC8307/L-OHP和THC8307的差異表達(dá)基因，表達(dá)差異在8倍以上的有62個(gè)，其中表達(dá)上調(diào)的基因20個(gè)，表達(dá)下調(diào)的基因42個(gè)。 4、半定量RT-PCR實(shí)驗(yàn)中，7個(gè)基因（S100P，TCF8，STA15，STK17A，CAⅨ，ARHGDIA和AAMP）在THC8307/L-OHP與THC8307中的表達(dá)趨勢(shì)與芯片結(jié)果一致?；?/p>