人結腸癌耐藥細胞系的建立及其耐藥相關基因的研究.pdf

1、目的： 腫瘤病人對藥物的耐受是臨床上令人十分棘手的問題，迫切需要建立一種能夠預測病人個體對化療藥物療效的檢測方法。本研究利用基因芯片技術篩選結腸癌細胞中草酸鉑耐藥與敏感相關的基因，為結腸癌草酸鉑耐藥分子機制的研究提供新的線索，并為臨床提供預測個體化化療敏感性的分子標記。 方法： 利用MTT方法檢測人結腸癌細胞系THC8307對5-FU和L-OHP的敏感性。將THC8307持續(xù)培養(yǎng)在含L-OHP的培養(yǎng)基中，藥物濃度

2、從0．108μg/ml開始，經過12個逐漸遞增的藥物濃度，在終濃度為6μg/ml的培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)4個月后，分析細胞增殖和藥物毒性的差異。進一步用寡核苷酸芯片分析親代細胞THC8307和耐藥細胞THC8307/L-OHP基因表達譜的差異，部分表達差異的基因進一步用半定量RT-PCR進行驗證。 結果： 1、THC8307細胞對L-OHP和5-FU表現(xiàn)出較高的敏感性。草酸鉑對細胞的IC50值為5．334±0．57μg/ml（

3、小于1PPC），5-FU對細胞的IC50值為32．200±26．20μg/ml（大于1PPC）。 2、穩(wěn)定的耐藥細胞模型THC8307/L-OHP與親代細胞THC8307對L-OHP的敏感性不同，具有顯著性差異（P<0．01），同時THC8307/L-OHP對5-FU有一定的交叉耐藥。L-OHP對THC8307/L-OHP的IC50值為172．92±54．48μg/ml，耐藥性是親代細胞的30．99倍，5-FU對細胞的IC50值

4、為215．60±6．96μg/ml，耐藥性是親代細胞的6．70倍。 3、寡核苷酸芯片分析THC8307/L-OHP和THC8307的差異表達基因，表達差異在8倍以上的有62個，其中表達上調的基因20個，表達下調的基因42個。 4、半定量RT-PCR實驗中，7個基因（S100P，TCF8，STA15，STK17A，CAⅨ，ARHGDIA和AAMP）在THC8307/L-OHP與THC8307中的表達趨勢與芯片結果一致?；?/p>