食管癌血清分泌蛋白的蛋白質(zhì)組學研究及血清白蛋白結合蛋白的鑒定.pdf

1、血漿是血液的一個重要的組成成分,具有重要的生理功能.當人體器官的發(fā)生病理損害時可引起血漿蛋白發(fā)生質(zhì)和量的改變,分析這種特征性的變化對疾病診斷和療效監(jiān)測具有十分重要的意義.血漿同時又是一個復雜和動態(tài)變化的系統(tǒng),含有種類繁多、豐度各異的蛋白質(zhì),給人們的研究工作帶來了困難.隨著蛋白質(zhì)組學技術手段的不斷豐富和發(fā)展,血漿蛋白質(zhì)組計劃的啟動,為全面而系統(tǒng)地認識健康和疾病狀態(tài)下血液循環(huán)中血漿蛋白的性質(zhì)提供了有利的平臺.食管鱗癌是我國常見的惡性腫瘤,目

2、前缺乏有效的早期診斷方法.本研究選用不同的蛋白質(zhì)組學技術手段,分離和鑒定食管鱗癌相關的分泌蛋白/小分子肽"標志物".首先用食管鱗癌患者血清識別食管鱗癌組織和細胞系中腫瘤相關蛋白,富集的候選蛋白經(jīng)SDS-PAGE分離,使用液相串連質(zhì)譜(LC-MS/MS)鑒定出食管癌相關蛋白20種.其中,Ku70蛋白經(jīng)Western blot和免疫組化驗證,在食管癌組織和血清中表達明顯增強,是食管癌候選的血清標志蛋白.因此使用腫瘤病人自身免疫血清作為分子探

3、針,識別、富集腫瘤相關蛋白,結合蛋白質(zhì)組學分離和鑒定技術是發(fā)現(xiàn)體液腫瘤候選標志分子的新途徑.血漿叢集素(clusterin)是用2DE-MALDI-TOF-TOF方法鑒定出來的一種新的分泌型食管鱗癌血清候選標志蛋白,在食管鱗癌血清和組織中表達明顯降低或缺失.經(jīng)基因缺失分析、半定量RT-PCR、Western blot和免疫組化等方法,發(fā)現(xiàn)食管鱗癌中clusterin基因存在N端缺失、蛋白水解剪切受阻和未成熟型(核型)clusterin在

4、食管癌上皮中過表達等現(xiàn)象與食管鱗癌發(fā)生發(fā)展過程相關.白蛋白是血漿中的一種重要的高豐度蛋白,可以作為一種載體與體內(nèi)的一些潛在生物標志分子相結合,發(fā)揮重要的作用.目前血漿蛋白質(zhì)組學研究常用的一些去除高豐度蛋白的方法通常都忽視了這一重要因素,即在去除高豐度蛋白的同時,也會把這些十分重要的低豐度蛋白帶走.本研究利用抗白蛋白抗體免疫沉淀血清中的白蛋白,經(jīng)SDS-PAGE分離抗原-抗體復合物,經(jīng)LC-MS/MS分析和鑒定在生理狀態(tài)下可能與白蛋白結合