聚電解質(zhì)微囊化重組亞油酸異構酶的制備及活性的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、共軛亞油酸(Conjugated Linoleic Acid,CLA)是一種具有諸多生理功能的天然脂肪酸,現(xiàn)已被用于食品、保健品、飼料工業(yè)等領域,有著較為廣闊的應用前景。而亞油酸異構酶(Linoleic Acid Isomerase,LAI)作為共軛亞油酸生物轉(zhuǎn)化的關鍵酶有著極為重要的研究意義。
  目前,微生物發(fā)酵生產(chǎn)CLA可以獲得單一異構體、生產(chǎn)條件較溫和、活性異構體高含量,但是在生產(chǎn)過程中微生物發(fā)酵也存在不少問題,如底物抑制

2、菌體生長、微生物培養(yǎng)易污染等。生物酶法生產(chǎn)CLA可以解決底物對菌體生長的抑制等問題,且生產(chǎn)條件溫和、生產(chǎn)設備簡單、對環(huán)境無污染。所以,獲得高活性、高純度、高穩(wěn)定性的LAI是實現(xiàn)CLA量產(chǎn)的必經(jīng)之路。
  本研究從基因工程菌JM109-LAI-pQE30中誘導表達重組LAI,經(jīng)親和層析得到純化的重組LAI;為了提高重組LAI的穩(wěn)定性,隨后采用聚電解質(zhì)層層自組裝技術對LAI進行微囊化,并對微囊化LAI進行酶學性質(zhì)的研究。結論如下:

3、r>  (1)基因工程菌JM109-LAI-pQE30誘導表達重組LAI的最佳條件:誘導時機為培養(yǎng)菌體7h時進行誘導,誘導培養(yǎng)時間為10h,誘導劑濃度為0.15mM,誘導培養(yǎng)溫度為30℃。最佳誘導表達條件下所得LAI粗酶液酶活力為(3.85±0.075)×103U/mL。通過SDS-PAGE電泳檢測可得,LAI的相對分子量為64.7kD。
  (2)經(jīng)Ni-NTA樹脂純化,純化后LAI比活力為2.16×103U/mg、酶活力回收率

4、為87%、純化倍數(shù)23.3倍。經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測可見較為單一的條帶,純化成功。
  (3)利用聚電解質(zhì)層層自組裝技術對LAI進行微囊化,所得結論如下:(a)在光學顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡下均可見,模板及制備的微囊化LAI呈球狀;(b)制備模板的CaCl2∶NaCO3∶LAI的最佳比例為1∶1∶2;(c)采用4個PAH/PSS雙層膜制備的LAI微膠囊比活力最高可達(2.12±0.085)×103U/mg;(d)微囊化LAI最

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