基于固相糖鏈標記的蛋白糖基化分析方法研究.pdf

1、蛋白質(zhì)翻譯后修飾是哺乳動物擴展蛋白質(zhì)功能的重要形式,其中蛋白糖基化是主要的翻譯后修飾過程之一,哺乳動物中大于50％蛋白都具有糖基化。糖蛋白中的糖鏈結構參與了蛋白的許多重要生物學功能,在蛋白折疊、細胞黏附、免疫響應、病毒入侵、腫瘤轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮著關鍵的作用。
　　針對蛋白質(zhì)N-糖基化的糖組學研究是糖生物學領域的研究熱點之一。目前常用的蛋白糖基化分析方法大多通過PNGaseF酶將N-糖鏈從蛋白上水解,水解下來的糖鏈可以直接運用MALD

2、I-TOF質(zhì)譜分析得到初步的糖鏈結構概況。MALDI-TOF質(zhì)譜雖然對糖鏈分析有較高的靈敏度,但是難以精確定量,目前常用的定量方法主要以熒光標記為主。利用糖鏈還原端的醛基與帶熒光的芳香氨基形成Shiff堿,然后在還原劑作用下穩(wěn)定地引入熒光標記,如2AA、2AB、2PA等,用于定量的蛋白糖基化分析。結合熒光檢測器與LC-MS分析,這種方法能高靈敏度地定量檢測糖鏈結構,非常適用于微量的蛋白糖基化分析,因而被廣泛使用。另一方面,該方法的標記反

3、應過程中操作復雜,糖鏈的分離富集步驟繁瑣,過量反應試劑難以除去等問題也同樣存在。建立和發(fā)展一種高效的糖鏈標記方法快速地富集糖鏈進行質(zhì)譜分析與結構解析對于糖組學研究至為重要。
　　本論文以來源于生物樣品的糖蛋白為對象,旨在建立了一種固相糖鏈標記的方法快速高效地標記從糖蛋白上切斷的糖鏈,結合LC-MS技術,可快速富集糖鏈用于定量定性分析。同時,將蛋白糖基化分析的方法運用到標準糖蛋白和腫瘤標志物當中,使該方法能夠更好的為疾病的發(fā)生和診斷