大米活性肽抗氧化機(jī)理的研究.pdf

1、本論文測(cè)定了大米活性肽對(duì)自由基的體外清除能力，通過(guò)采用H2O2作為外源性自由基生成系統(tǒng)，模擬血管內(nèi)皮細(xì)胞的氧化損傷，建立體外培養(yǎng)的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷模型，觀察和分析大米活性肽預(yù)處理后對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。采用MTT法測(cè)定血管內(nèi)皮細(xì)胞存活率的變化，光鏡、熒光顯微鏡及透射電鏡觀察大米活性肽保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞抗氧化損傷前后形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)的變化，并通過(guò)Westernblot檢測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)凋亡因子Caspase-3、NF-κ

2、B在H2O2氧化損傷以及大米活性肽保護(hù)過(guò)程中的表達(dá)變化，以此研究和探討大米活性肽對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的抗氧化保護(hù)機(jī)制。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，大米活性肽對(duì)DPPH自由基、羥自由基的清除能力較高，分別可達(dá)46.76％和68.23％。體外造模結(jié)果顯示，HUVEC氧化損傷模型的建立以300μmol/LH2O2作用24小時(shí)為最佳造模條件;大米活性肽在0.1mg/mL-0.3mg/mL范圍內(nèi)對(duì)氧化損傷HUVEC具有保護(hù)作用，且最佳作用時(shí)間以24-

3、36小時(shí)為宜。光鏡及電鏡觀察結(jié)果顯示，正常對(duì)照組細(xì)胞呈梭形或多角形，大小均勻，邊緣清晰，單層鑲嵌排列，胞漿豐富，細(xì)胞核位于細(xì)胞中央，呈圓形或橢圓形，并有多個(gè)核仁，細(xì)胞生長(zhǎng)良好，貼壁牢固，細(xì)胞間緊密連接;H2O2損傷組細(xì)胞收縮變圓，胞體變小，細(xì)胞間隙增大，胞核變的模糊，細(xì)胞膜邊緣模糊不清，細(xì)胞有明顯脫落現(xiàn)象。不同濃度保護(hù)組中0.25mg/mL大米活性肽處理的HUVEC細(xì)胞活力顯著高于氧化損傷模型組，細(xì)胞存活率亦顯著高于氧化損傷模型組，細(xì)胞

4、形態(tài)相比于氧化損傷模型組更趨于正常、完整，細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)相比于氧化損傷模型組，細(xì)胞器數(shù)量更豐富，形態(tài)更發(fā)達(dá)。Westernblot免疫印跡結(jié)果顯示H2O2損傷模型組(300μmol/L)細(xì)胞Caspase-3、NF-κB蛋白表達(dá)水平顯著高于正常對(duì)照組、大米活性肽對(duì)照組和大米活性肽保護(hù)組;大米活性肽保護(hù)組細(xì)胞Caspase-3、NF-κB蛋白表達(dá)水平高于正常對(duì)照組而明顯低于H2O2損傷模型組(300μmol/L)。
　　 研究結(jié)果表