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1、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)是一種廣泛存在于原核生物和真核生物中的非蛋白質(zhì)氨基酸,具有多種生理功能,例如降血壓、改善睡眠、治療抑郁、預(yù)防糖尿病、活化肝腎功能等,被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域。GABA主要是通過(guò)谷氨酸脫羧酶(GAD)催化谷氨酸脫羧轉(zhuǎn)化而成的。乳酸菌、酵母菌、霉菌以及其他微生物中均含有這種酶,因此,可通過(guò)提取谷氨酸脫羧酶或通過(guò)微生物發(fā)酵來(lái)生產(chǎn)GABA。梨果肉質(zhì)細(xì)脆,含糖量高,香甜爽口,營(yíng)養(yǎng)
2、豐富,是釀造果酒的良好原料。本課題的目的是釀造富含GABA的梨酒,以便強(qiáng)化梨酒的保健功能。
高產(chǎn)GABA釀酒酵母的誘變選育。以既有較強(qiáng)產(chǎn)GABA能力,又有較強(qiáng)產(chǎn)酒精能力的釀酒酵母KS45為出發(fā)菌株,采用常壓室溫等離子體(ARTP)進(jìn)行誘變選育,獲得了高產(chǎn)GABA的2株釀酒酵母:KS45-60和KS45-180,其產(chǎn)GABA能力分別超KS45的14.9%和36.08%,其中KS45-180產(chǎn)量最高。ARTP最適誘變條件:電源功率
3、為120 w、工作氣流量為10 L/min、等離子體發(fā)射源與樣品之間距離為2mm、樣品量為10μL、利用氦氣作為工作氣體、產(chǎn)生的等離子體溫度在25℃~35℃(室溫)、處理時(shí)間為60 s和180 s。高產(chǎn)菌株經(jīng)過(guò)連續(xù)6次傳代,其GABA產(chǎn)量處于穩(wěn)定狀態(tài),可其用于富含GABA梨酒的釀造。
梨酒釀造過(guò)程中γ-氨基丁酸產(chǎn)生特性研究。結(jié)果表明,GABA的大量產(chǎn)生是在梨酒主酒精發(fā)酵完成后隨即啟動(dòng)的;在梨酒主酒精發(fā)酵結(jié)束后,隨著發(fā)酵時(shí)間的延
4、長(zhǎng),酵母活菌數(shù)逐漸下降,而GABA含量卻持續(xù)快速增加,二者呈現(xiàn)出負(fù)相關(guān)的關(guān)系;在梨酒主酒精發(fā)酵階段,GAD酶活快速增加并達(dá)到最大值,而在主酒精發(fā)酵結(jié)束后,GAD酶活快速下降;將梨酒上清液在30℃下繼續(xù)發(fā)酵14d,發(fā)現(xiàn)殘存的GAD游離酶仍可合成GABA,使得梨酒中GABA含量繼續(xù)增加;在酒精發(fā)酵階段,培養(yǎng)基中的糖含量快速下降,并且GABA含量也下降,而主酒精發(fā)酵結(jié)束后,糖含量趨于穩(wěn)定并大量合成累積GABA;主發(fā)酵時(shí)候,pH逐漸下降,發(fā)酵結(jié)
5、束后趨于穩(wěn)定,這是由于酵母菌消耗有機(jī)物,產(chǎn)生一些酸性物質(zhì),如丙酮酸等等,這些物質(zhì)降低了培養(yǎng)基的pH,酒精發(fā)酵結(jié)束后有機(jī)物消耗降低,產(chǎn)酸能力也下降,最后趨于穩(wěn)定。
富含γ-氨基丁酸梨酒的釀造工藝研究。研究了溶氧量、谷氨酸鈉添加時(shí)間、糖度、接種量、溫度、過(guò)濾、pH、二氧化硫添加量對(duì)梨酒中GABA含量的影響,得到適宜的富含GABA梨酒的釀酒工藝為:裝液量為100%,接種量為10%,初始糖度為20%,發(fā)酵溫度為30℃,初始pH為5,在
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