γ-氨基丁酸產(chǎn)生菌的選育及發(fā)酵工藝研究.pdf

1、本論文主要研究了發(fā)酵液中γ-氨基丁酸(γ-aminobutyricacid，GABA)的測(cè)定方法、GABA產(chǎn)生菌的選育及產(chǎn)酸條件優(yōu)化，主要內(nèi)容及結(jié)果如下： 1)論文首先研究了GABA的測(cè)定方法，即用紙層析法定性分析GABA，紙層析-比色法定量分析GABA。確定了紙層析分析方法中展開(kāi)劑和顯色劑的組成，展開(kāi)劑組分正丁醇：冰醋酸：水(V/V)：2：1:1為最優(yōu)比例，顯色劑茚三酮濃度為8g/L時(shí)較為合適，此時(shí)GABA和谷氨酸的Rf值有明

2、顯差異，分離效果最好。并確定了最佳分析條件：當(dāng)波長(zhǎng)在513nm處，顯色溫度為80℃、顯色時(shí)間和洗脫時(shí)間均為30min時(shí)，實(shí)驗(yàn)效果最明顯。并制作了GABA含量與吸光度值的關(guān)系曲線，即GABA標(biāo)準(zhǔn)曲線，為常規(guī)檢驗(yàn)樣品中的GABA含量提供了可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。進(jìn)一步對(duì)樣品重復(fù)性實(shí)驗(yàn)、加標(biāo)回收率等進(jìn)行了分析，試驗(yàn)結(jié)果表明，紙層析.比色法定量GABA的試驗(yàn)方案重復(fù)性較好，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差僅為0.272％，加標(biāo)回收試驗(yàn)的平均回收率為98.1％，說(shuō)明此法測(cè)定

3、具有較高的可靠性，為后續(xù)研究工作奠定了基礎(chǔ)。 2)實(shí)驗(yàn)從酸菜中分離、篩選到一株野生菌(乳酸菌35＃)，它能夠?qū)-谷氨酸鈉轉(zhuǎn)化為GABA，產(chǎn)量為1.85g/L，是一株很有潛力高產(chǎn)GABA的菌株。隨后對(duì)35＃菌的形態(tài)學(xué)特征及生理生化特征進(jìn)行了研究，在MRS培養(yǎng)基上30℃培養(yǎng)2d后，發(fā)現(xiàn)菌落較小，呈圓形乳白色，不透明，中間隆起，邊緣整齊，周邊有小皺紋，表面濕潤(rùn)光滑。其分類(lèi)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)：菌株為G+，兼性厭氧，石蕊牛乳試驗(yàn)使石蕊變紅，不液

4、化明膠，不產(chǎn)硫化氫，V-P試驗(yàn)陽(yáng)性，不產(chǎn)過(guò)氧化氫酶，吲哚試驗(yàn)陰性，甲基紅試驗(yàn)陽(yáng)性，葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，蔗糖、果糖、乳糖、甘露糖等發(fā)酵陽(yáng)性，最適生長(zhǎng)溫度28～34℃，最適生長(zhǎng)pH6.5～7.5。根據(jù)《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》，該菌株初步鑒定為乳酸鏈球菌。 3)實(shí)驗(yàn)還對(duì)乳酸菌35＃的發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，得出培養(yǎng)基的組成(g/L)：蔗糖10，丁二酸鈉10；胰蛋白胨5，酵母膏5；L-谷氨酸鈉10；優(yōu)化后的最佳發(fā)酵條件：培養(yǎng)基初始