茶葉γ-氨基丁酸富集方法及其檢測(cè)方法的研究.pdf

1、γ-氨基丁酸（又稱4-氨基丁酸，γ-aminobutyric acid，簡(jiǎn)稱GABA）是一種非蛋白質(zhì)天然氨基酸，具有良好的保健功效。茶鮮葉具有GABA生物合成基礎(chǔ)，是天然GABA的良好來(lái)源。目前，GABA在茶葉中的富集方法較為單一，成本相對(duì)較高，本研究以茶鮮葉為材料，按普通烘青綠茶生產(chǎn)工藝，采用多種逆境處理方式研究富集GABA的方法，旨在探索新的GABA富集方式；并采用ODS-C18色譜柱HPLC法，利用2、4-二硝基氟苯（2，4-Di

2、nitro-1-fluorobenzene，簡(jiǎn)稱DNFB）柱前衍生，進(jìn)行茶葉中的GABA與L-谷氨酸（L-Glutamic acid，簡(jiǎn)稱L-Glu）的精確定量方法研究，為茶葉源GABA的檢測(cè)提供一種準(zhǔn)確的、成本相對(duì)低廉的分析手段。
　　 采用DNFB柱前衍生，以0.05M乙酸鈉緩沖液（pH=6.5，含10mL/L，N-二甲基甲酰胺）和50％乙腈（V/V）為流動(dòng)相，建立了茶葉源GABA和L-Glu的HPLC檢測(cè)方法，并與Wate

3、rsAccQ·Tag法進(jìn)行了對(duì)比。同時(shí)考察了DNFB試劑的用量，衍生產(chǎn)物的穩(wěn)定性及檢測(cè)波長(zhǎng)。結(jié)果表明：GABA與L-Glu濃度在0.03mM～2.0mM范圍內(nèi)，峰面積與濃度之間有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2均為1；各樣品γ-氨基丁酸、L-谷氨酸含量RSD（％）分別為0.91％～2.01％和0.94％～1.91％，加標(biāo)回收率分別為95.82％～99.33％和95.83％～99.88％；10mL/LDNFB乙腈溶液添加量1mL；避光保存一周

4、內(nèi)，衍生物穩(wěn)定性良好；衍生物檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm。
　　 獲得HPLC色譜條件：SHIMADZU LC-20AD液相色譜儀，LCsolution液相色譜工作站；色譜柱：大連Elite Hypersil ODS-C18柱（250min×4.6mm i．d．，51μn）；流動(dòng)相A：0.05M乙酸鈉緩沖液（pH=6.5，含10mL/L N，N-二甲基甲酰胺）；流動(dòng)相B：乙腈-水（V/V=1：1）；流速：1.0mL/min；柱溫：28℃

5、；進(jìn)樣量：5μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：360nm。
　　 采用充CO2、充N2、真空、水浸漬、冷凍、紫外線照射等方式對(duì)茶鮮葉進(jìn)行GABA富集處理，并以常規(guī)綠茶加工為對(duì)照，對(duì)處理過(guò)程中GABA和L-Glu的含量變化進(jìn)行考察。結(jié)果表明：常規(guī)的綠茶加工過(guò)程中，GABA含量介于0.04mg/g～0.05mg/g，GABA不會(huì)富集；CO2厭氧處理GABA在茶鮮葉中富集，其含量從0.04mg/g升至2.90mg/g，并GABA與L-Glu呈現(xiàn)出明顯的

6、消長(zhǎng)關(guān)系，L-Glu含量從起始的1.57 mg/g降至0.42mg/g；充N2厭氧處理過(guò)程中，亦呈現(xiàn)出類似規(guī)律，GABA含量從0.04mg/g升至2.43mg/g，L-Glu則從起始的1.57 mg/g降至0.43 mg/g；真空度0.04-0.1MPa范圍內(nèi)，鮮葉中GABA的富集并不明顯，GABA含量峰值僅為0.47mg/g，而L-Glu在處理始末含量卻有所增加；水浸漬處理過(guò)程中，GABA與L-Glu也呈現(xiàn)消長(zhǎng)關(guān)系，但不明顯，GABA

7、峰值僅為0.81mg/g，L-Glu最低值為1.22mg/g；冷凍和紫外線照射處理均未能使得鮮葉中GABA的總量有所增加，L-Glu含量始末變化不大。
　　 為了更好的明確逆境處理?xiàng)l件，本研究考察了光照條件對(duì)CO2厭氧處理和水浸漬處理的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：光照條件對(duì)不同逆境處理介質(zhì)的影響不相同。光照處理GABA峰值分別比暗處理?xiàng)l件下高出0.68mg/g（CO2厭氧處理）和0.52 mg/g（水浸漬處理）。CO2厭氧處理光照條件下，G

8、ABA在厭氧處理階段富集，在有氧階段呈下降；水浸漬處理光照條件下，GABA在有氧階段富集，在水浸漬階段下降。CO2厭氧光照處理使得L-Glu消耗的更多；水浸漬光照處理對(duì)L-Glu的變化趨勢(shì)有影響，但L-Glu最終含量在增加。
　　 各處理GABA富集效果依次為：光照CO2厭氧處理（峰值2.90mg/g）、光照N2厭氧處理（峰值2.43mg/g）、遮光CO2厭氧處理（峰值2.22mg/g）、光照水浸漬處理（峰值1.33mg/g）、

9、遮光水浸漬處理（峰值0.81mg/g）、真空處理（峰值0.47mg/g）、冷凍處理（峰值0.11mg/g）和紫外線照射處理（峰值0.07mg/g）。
　　 通過(guò)分析檢測(cè)、香氣成分分析和感官審評(píng)，考察了富集GABA處理對(duì)茶樣主要化學(xué)成分和品質(zhì)的影響。結(jié)果表明：咖啡堿和兒茶素總量與對(duì)照組相比，變化不大；對(duì)照樣茶多酚含量總體變化不大，充CO2、充N2、真空、紫外線照射處理對(duì)茶多酚含量影響不大，水浸漬處理使得茶多酚總量有所增加，含量達(dá)到

10、了30％以上，冷凍處理過(guò)程中，茶多酚總量減少了5.47％。除了冷凍處理含量基本不變，其余各處理氨基酸總量均有不同程度的增加：對(duì)照組氨基酸總量增幅達(dá)27.8％，紫外照射處理結(jié)果與對(duì)照組相近，充CO2、充N2也有13.4％～16.5％的增幅，真空處理增幅達(dá)到25.2％，水浸泡處理也有較小增幅。各處理可溶性糖呈現(xiàn)無(wú)規(guī)律變化。處理間香精油組分差異較明顯，主要香氣物質(zhì)種類和數(shù)量不盡一致，但同一處理介質(zhì)（A、B，G、H）間無(wú)明顯差異。茶樣感官審評(píng)結(jié)