納米聚苯胺對巨噬細胞毒性及相關(guān)機制研究.pdf

1、21世紀以來,納米材料在不斷得到新的應用的同時,其安全性也引起了人們的關(guān)注。本文旨在研究納米聚苯胺材料對大鼠原代腹腔巨噬細胞的毒性作用及其相關(guān)機理。
　　本文以快速表面聚合法制備納米聚苯胺材料,以大鼠原代巨噬細胞為對象,染毒24h、48h、72h后通過四甲基偶氮唑鹽(MTT)觀察納米聚苯胺材料的細胞毒性,并根據(jù)染毒后細胞的過氧化水平(ROS)和線粒體膜電位變化情況分析納米聚苯胺的細胞損傷作用,Hoechst染色觀察巨噬細胞凋亡狀況

2、,利用WesternBlot檢測細胞凋亡相關(guān)的caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白,并采用RT-PCR檢測凋亡相關(guān)的caspase-3、Bax和Bcl-2的mRNA表達水平。
　　結(jié)果顯示0.1μg/ml和1μg/ml納米聚苯胺刺激后對巨噬細胞存活率無明顯影響,而10和100μg/ml的納米聚苯胺顆粒均引起巨噬細胞的凋亡(p<0.05,p<0.01),并引起巨噬細胞活性氧水平升高和線粒體膜電位丟失。受到納

3、米聚苯胺刺激后,巨噬細胞caspase-8、9蛋白表達量無明顯變化,caspase-3蛋白表達略有升高同時被激活,并且caspase-3核酸轉(zhuǎn)錄水平顯著升高,Bcl-2/Bax比值較空白對照組有明顯降低。
　　由此推測納米聚苯胺誘導巨噬細胞凋亡機理可能為:納米聚苯胺與巨噬細胞互相接觸后,被巨噬細胞吞噬,誘使細胞Bcl-2水平下降,Bax水平上升,線粒體膜通透性增加,線粒體膜電位大幅下降或丟失,巨噬細胞活性氧水平小幅度升高,活性氧以