基于Fc融合蛋白細胞外基質(zhì)的構(gòu)建及其生物活性研究.pdf

1、生命體內(nèi)龐大的血管網(wǎng)絡(luò)為細胞供應(yīng)充足的氧氣和養(yǎng)分是實現(xiàn)細胞代謝和功能的關(guān)鍵。血管內(nèi)皮細胞作為血管結(jié)構(gòu)的重要組成部分之一，具有調(diào)節(jié)細胞活性分子表達、血管新生以及血管滲透性的功能。因此，仿生構(gòu)建具有調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細胞粘附、增殖、生存的細胞外基質(zhì)（ECM），是解決人工構(gòu)建功能性組織或器官時缺乏充足血管系統(tǒng)問題的方法之一。
　　本文利用基因重組技術(shù)，分別構(gòu)建了含有血管內(nèi)皮細胞生長因子（VEGF）、免疫球蛋白IgG的Fc段基因序列的重組質(zhì)粒p

2、cDNA3.1-VEGF-Fc和含有VEGF、MMP-2特異內(nèi)切底物和Fc段基因序列的重組質(zhì)粒pcDNA3.1-VEGF-SMP-Fc。用人胚胎腎293F細胞真核體系表達融合蛋白VEGF-Fc和蛋白酶敏感型融合蛋白VEGF-SMP-Fc，且經(jīng)蛋白質(zhì)A親和層析色譜柱純化后，兩種融合蛋白純度均達到85％以上。再分別將純化的融合蛋白物理吸附固定在疏水聚苯乙烯材料表面，形成生長因子型人工ECM和蛋白酶敏感型人工ECM。
　　結(jié)果表明，融合

3、蛋白VEGF-Fc構(gòu)建的人工ECM顯著性提高人臍帶血管內(nèi)皮細胞（HUVECs）在疏水材料表面的粘附能力，并且在72h內(nèi)有效促進HUVECs增殖。通過細胞骨架染色，可以明顯看出在融合蛋白VEGF-Fc基質(zhì)表面生長的內(nèi)皮細胞誘導肌動蛋白纖維重新組合形成應(yīng)力纖維。且生長因子型人工ECM能有效調(diào)節(jié)內(nèi)皮細胞功能性分子的表達，在基質(zhì)表面快速形成內(nèi)皮層，進而調(diào)節(jié)血管的形成和滲透性。
　　此外，與商品化VEGF-165的半衰期（約12h）相比，融