細胞-細胞外基質復合材料修復尿道缺損的實驗研究.pdf

1、目的：本研究利用組織工程原理和干細胞技術，構建尿道組織，修復兔尿道全段缺損。對細胞與細胞外基質材料在體外的復合方法，復合細胞材料修復尿道缺損的過程及其與單純細胞外基質材料修復效果的差異，種子細胞在植入機體后的命運轉歸進行初步探討，為進一步研究奠定基礎。同時初步探討利用BMSC-FG作為填充材料(Bulking Agent，BA)治療壓力性尿失禁及膀胱輸尿管返流的可行性。 方法：①選擇兔膀胱尿路上皮細胞、兔膀胱平滑肌細胞及兔骨髓間

2、充質干細胞(BMSC)作為種子細胞，采用相應的培養(yǎng)及純化策略，獲取滿足實驗要求的種子細胞。并對兩種可行的上皮細胞培養(yǎng)方案進行對比，選擇更好的培養(yǎng)方法。利用細胞計數(shù)及MTT法對三種細胞在體外的生長增殖情況進行研究。利用脂質體轉染對兔BMSC進行綠色熒光蛋白基因轉染，試圖獲得穩(wěn)定表達。②選擇兩種常用的泌尿外科組織工程材料——同種膀胱細胞外基質BECM和豬小腸粘膜下層SIS分別與兔BMSC及兔尿路上皮細胞進行復合培養(yǎng)，在體外構建尿道工程組織，

3、對細胞在材料表面的分布及增殖情況進行研究。③分別利用復合有兔BMSC及尿路上皮細胞的兔膀胱細胞外基質對長度為1.5—2.0cm的雄性兔懸垂部全長尿道缺損進行原位修復實驗，并與單純BECM修復進行對比，32只動物分為4組，分別為單純BECM修復組(組1)，骨髓間充質干細胞(BMSC)復合：BECM修復組(組2)，尿路上皮復合BECM。組(組3)，假手術組(組4)。分別于1w、2w、4w及12w取材通過大體觀、組織學方法、尿道膀胱造影觀察組

4、織再生與修復情況。組2、組3于修復前對種子細胞進行BrdU標記，取材后以免疫組化尋找BrdU標記細胞。④6 R新西蘭兔進行自體對照實驗，，每只動物均在膀胱頸口3點及9點鐘部位注射兩點，分別為實驗點(采用纖維蛋白膠(FG)為載體復合BrdU標記的兔BMSC)與對照點(同法注射的單純纖維蛋白膠)。分別于術后2w、4w及8w取材行組織學，免疫組化檢查。 結論：膀胱上皮細胞及平滑肌細胞、BMSC均可快速培養(yǎng)，純化擴增并作為組織工程的種子