天然細(xì)胞外基質(zhì)的制備與改性的研究.pdf

1、組織工程是治療組織、器官功能衰退和缺失的重要技術(shù)手段，在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用曰趨廣泛，其中支架材料是組織工程技術(shù)的重要組成部分。天然細(xì)胞外基質(zhì)作為一種天然支架，生物相容性好，免疫原性低，不易造成種植細(xì)胞的排斥與感染，在組織工程研究中具有重大意義。它與被替代組織的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)成分與結(jié)構(gòu)基本相同。本研究探討了制備源于豬不同部位的膜狀、管狀和實質(zhì)臟器的ECM作為支架進(jìn)行移植替代修復(fù)人類組織、器官缺損的可行性。 本文采取了酶解脫細(xì)胞的方

2、法制備了豬不同部位的膜狀、管狀和實質(zhì)臟器的ECM，結(jié)果證明能有效脫除干凈細(xì)胞，降低了ECM的免疫原性。 天然細(xì)胞外基質(zhì)雖然免疫原性低，生物相容性好，但其機(jī)械強(qiáng)度和降解性能常不足以滿足臨床需要。對天然細(xì)胞外基質(zhì)進(jìn)行改性，可以有效改善機(jī)械強(qiáng)度及其在體內(nèi)的降解性能，同時使其更有利于細(xì)胞的粘附、鋪展、生長、增殖、功能表達(dá)，使細(xì)胞和分子產(chǎn)生響應(yīng)的特異性識別位點和特異性基因的表達(dá)。 本研究分別通過戊二醛、N，N環(huán)己基碳化二亞胺、1.

3、2.7.8-雙環(huán)氧辛烷和京尼平，對豬組織的膜狀、管狀和實質(zhì)臟器的ECM進(jìn)行改性。發(fā)現(xiàn)四種交聯(lián)劑在交聯(lián)效果方面有所差異。比較而言，京尼平在這四種交聯(lián)劑中，對于ECM縫線拉伸斷裂強(qiáng)度、抗降解性能、細(xì)胞毒性和溶血性方面的改善效果最好，其中： (1)縫線拉伸斷裂強(qiáng)度：京尼平交聯(lián)的ECM)戊二醛交聯(lián)的ECM)1.2.7.8-雙環(huán)氧辛烷交聯(lián)的ECM)N，N環(huán)己基碳化二亞胺交聯(lián)的ECM； (2)抗降解程度：京尼平交聯(lián)的ECM)1.

4、2.7.8-雙環(huán)氧辛烷交聯(lián)的ECM)N，N-環(huán)己基碳化二亞胺交聯(lián)的ECM)戊二醛交聯(lián)的ECM： (3)細(xì)胞毒性：戊二醛交聯(lián)的ECM細(xì)胞毒性最大，N，N環(huán)己基碳化二亞胺、1.2.7.8-雙環(huán)氧辛烷和京尼平交聯(lián)的ECM細(xì)胞毒性較?。?(4)溶血性：戊二醛和1.2.7.8-雙環(huán)氧辛烷交聯(lián)的ECM溶血性較大，N，N環(huán)己基碳化二亞胺和京尼平交聯(lián)的ECM溶血性較小。 進(jìn)而，采用京尼平對脫細(xì)胞后的豬的真皮、胸主動脈、膀胱、

5、心包、尿道、瓣膜、腹膜和輸尿管進(jìn)行交聯(lián)改性，探討制備工藝，測定交聯(lián)改性后產(chǎn)物的性能。改性后膜狀、管狀和實質(zhì)臟器ECM在性能上存在一定差異，但縫線拉伸斷裂強(qiáng)度和降解性能均得到改善，溶血性都能符合國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。 將上皮細(xì)胞接種于以上八種京尼平交聯(lián)的ECM上，觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在ECM支架材料上能夠良好生長。初步驗證了本實驗研究中獲得的改性后的天然細(xì)胞外基質(zhì)作為組織工程化支架應(yīng)用于組織的修復(fù)與重建的可行性，為組織工程化替代物的深入研究打下了基