HPLC同時測定食品中酸性橙Ⅱ和堿性嫩黃O方法建立及優(yōu)化.pdf

1、酸性橙Ⅱ(Acid OrangeⅡ)和堿性嫩黃O(Auramine O)作為非食用色素比其他水溶性染料更易染色且不易褪色，但是因為目前尚無這兩種非食用色素的國家標準推薦分析方法，因此常被不法商販違法添加于各類食品中。本研究建立并優(yōu)化高效液相色譜法同時檢測此2類非食用色素的方法，并通過加標回收率的變化分析，對酸性橙Ⅱ和堿性嫩黃O的前處理條件進行研究，同時利用此方法對市場中不同食品進行抽檢。主要研究結(jié)果如下:
　　1.根據(jù)酸性橙Ⅱ和堿

2、性嫩黃O的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，建立等梯度固定波長高效液相色譜法檢測2種非食用色素。對高效液相色譜中色譜柱、柱溫、流動相種類及比例、流速、波長等影響因素進行了研究及優(yōu)化，得到優(yōu)化后的色譜檢測條件為:色譜柱為Kromasil C18(4.6×150mm，5um);流動相為甲醇-50mmol/L乙酸銨溶液(V∶V)=50∶50;流速:1.0mL/min;檢測波長450nm;柱溫35℃。在上述條件下，堿性嫩黃O的保留時間為7.632min，酸性橙Ⅱ的保

3、留時間為11.548min，堿性嫩黃O和酸性橙Ⅱ的理論塔板數(shù)分別為3021和9084，峰底寬分別為0.477和0.435，分離度分別為5.62和7.11，且峰型正常，無拖尾現(xiàn)象。
　　2.采用超聲離心法提取不同食品中的酸性橙Ⅱ和堿性嫩黃O，并應(yīng)用建立的高效液相色譜法定量測定2種物質(zhì)的含量，以這2種非食用色素的總加標回收率為指標，考察提取劑種類、超聲提取時間、超聲次數(shù)、固液比、超聲溫度5個前處理的提取參數(shù)，最后用響應(yīng)面法優(yōu)化前處理。

4、得到食品中酸性橙Ⅱ和堿性嫩黃O的最佳前處理提取參數(shù)為:提取劑為甲醇，超聲時間30min，超聲溫度20℃，固液比為1∶3，超聲次數(shù)為3。此條件下實際檢測結(jié)果為酸性橙Ⅱ回收率90.03％，堿性嫩黃O回收率為87.26％。
　　3.對建立及優(yōu)化的HPLC同時檢測酸性橙Ⅱ和堿性嫩黃O的方法進行方法學(xué)評價。分析結(jié)果表明:酸性橙Ⅱ在進樣量0.025-0.125ug范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，線性方程為Y=2*106X-1240.1(r=0.999

5、9)，最低檢出限為0.120ug/kg，精密度為1.19％，在腐竹、黃魚、榨菜、雞肉、辣椒粉等5類食品中的重復(fù)性實驗結(jié)果RSD為分別為1.11％、1.98％、1.78％、1.93％、1.80％，日內(nèi)穩(wěn)定性RSD為1.18％，在五類食品中的加標回收率實驗結(jié)果分別為90.47％(RSD1.2％)、80.53％(RSD1.3％)、88.93％(RSD0.8％)、80.38％(RSD2.0％)、83.10％(RSD=1.8％)。
　　堿性

6、嫩黃O在進樣量0.025-0.125ug范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，線性方程為Y=7*106X-5284.2(r=0.9996)，最低檢出限為0.032ug/kg，精密度為1.10％，在腐竹、黃魚、榨菜、雞肉、辣椒粉等5類食品中的重復(fù)性實驗結(jié)果RSD為分別為1.47％、1.88％、1.87％、1.85％、1.93％，日內(nèi)穩(wěn)定性RSD為0.87％，在五類食品中的加標回收率實驗結(jié)果分別為102.64％(RSD=1.8％)、84.76％(RSD=

7、1.7％)、89.12％(RSD=1.4％)、98.42％(RSD=1.6％)、86.8％(RSD=2.2％)。
　　4.應(yīng)用本研究建立的高效液相色譜法檢測市場上不同食品中違法添加酸性橙Ⅱ和堿性嫩黃O的含量。本次抽檢樣品包括市售以及超市的豆制品（包括腐竹、豆干等）、肉制品（雞爪、真空包裝雞肉等）、鮮活類制品（黃魚、真空包裝黃魚等）、調(diào)味品（包括辣椒粉、豆瓣醬等）共40份樣品，在市售的辣椒粉中檢測到酸性橙Ⅱ含量為5.34 mg/kg