不同來源果膠多糖的結(jié)構(gòu)解析及抗腫瘤活性研究.pdf

1、果膠由于其豐富的生物活性，尤其是其抗腫瘤活性，得到廣泛的研究和應(yīng)用。果膠類物質(zhì)主要存在于植物細(xì)胞壁，廣泛分布于陸地植物和水生植物中。果膠結(jié)構(gòu)復(fù)雜，尋找結(jié)構(gòu)新穎、抗腫瘤活性顯著的果膠多糖具有重要的理論意義和潛在的應(yīng)用價值。本文以柑橘果膠為原料，建立了分步降解與串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析確定果膠精細(xì)結(jié)構(gòu)的方法。從3種海洋藻類和5種中藥材中獲得了8種果膠多糖，在進(jìn)行抗腫瘤活性評價基礎(chǔ)上，對其中4種果膠進(jìn)行了精細(xì)結(jié)構(gòu)研究，為其深入構(gòu)效關(guān)系研究提供依據(jù)

2、。研究結(jié)果如下:
　　首先以柑橘果膠為研究對象，建立了分步降解與寡糖質(zhì)譜聯(lián)用分析果膠精細(xì)結(jié)構(gòu)的方法，即通過分步酸降解和果膠酶解獲得來源于不同結(jié)構(gòu)域的寡糖，進(jìn)而采用ESI-CID-MSn鑒定其寡糖序列，為復(fù)雜多糖的精細(xì)結(jié)構(gòu)解析提供了靈敏高效的方法。共鑒定46種寡糖序列，發(fā)現(xiàn)了同時含有三種糖苷鍵類型的、高度異質(zhì)化的半乳四糖 Galβ1→3 Galβ1→4Ga1β1→6Galβ，首次通過寡糖Galβ1→2GalAα1→2Rhaα證明，G

3、alA的O-2位同樣可以引入Gal側(cè)鏈。
　　其次，從3種海洋來源大葉藻和5種中藥材中提取分離純化得到8種果膠多糖，采用已建立的分步降解與寡糖質(zhì)譜聯(lián)用的方法解析其中4種果膠的精細(xì)結(jié)構(gòu)。
　　從渤海灣植物叢生大葉藻中提取分離純化得到果膠多糖ZCAP，其分子量為77.23 kD，ZCAP含有AGA(70％)和RG-Ⅰ(30％)區(qū)域，其中AGA區(qū)域主鏈由→4-α-D-GalA1→同聚連接而成，側(cè)鏈為短的、3'-β-D-Api寡糖（

4、聚合度≤5），且Api連接于GalA的O-3位。RG-Ⅰ區(qū)域主鏈由[→4)-α-GalA-(1→2)-α-Rha-1(→]重復(fù)單元構(gòu)成，Gal和Ara側(cè)鏈較少。從渤海灣植物寬葉大葉藻中提取純化得到的果膠多糖ZAAP與ZCAP結(jié)構(gòu)類似。
　　從山東威海天鵝湖一種未鑒定大葉藻中提取分離純化得到果膠多糖ZMAP，其分子量為28.21 kD，ZMAP不僅包含HG、RG-Ⅰ和XG區(qū)域，還包含AG-Ⅱ組分，而不含有AGA區(qū)域。其中，HG區(qū)域由

5、(1→4)-α-L-GalA組成，RG-Ⅰ區(qū)域主鏈由[→4）-α-GalA-(1→2)-α-Rha-1(→]重復(fù)單元構(gòu)成，側(cè)鏈包括β-(1→4)半乳聚糖、以β-(1→3，6)-Gal為分支點(diǎn)的β-(1→6)半乳聚糖、以α-(1→3，5)-Ara為分支點(diǎn)的α-(1→5)阿拉伯聚糖。AG-Ⅱ主鏈為β-1，3鍵連接的半乳糖骨架，側(cè)鏈α-1,5鍵連接的Ara、β-1，6鍵連接的半乳糖連接于主鏈Gal的O-6位。
　　從當(dāng)歸中提取分離純化得

6、到果膠多糖DGP，其分子量為106.5、87.5 kD，DGP包含HG(20％)和RG-Ⅰ區(qū)域(80％)，RG-Ⅰ區(qū)域在Rha的O-4位存在大量的分支結(jié)構(gòu)，分支主要由Ara和Gal構(gòu)成，包括β-(1→4)半乳聚糖、以β-(1→3，6)-Gal為分支點(diǎn)的β-(1→6)半乳聚糖、以α-(1→3，5)-Ara為分支點(diǎn)的α-(1→5)阿拉伯聚糖、O-6位被α-(1→5)-Ara取代的β-(1→3)半乳聚糖、O-5位被β-(1→6)-Gal取代的

7、α-(1→3)阿拉伯聚糖等。
　　從人參中提取分離純化得到果膠多糖RSP，其分子量為26.6 kD，RSP主要包含HG(50％)和RG-Ⅰ區(qū)域(50％)，RG-Ⅰ區(qū)域在Rha的O-4位存在大量的分支結(jié)構(gòu)，分支主要由Ara和Gal構(gòu)成，包括β-(1→4)半乳聚糖、以β-(1→3,6)-Gal為分支點(diǎn)的β-(1→6)半乳聚糖、以α-(1→3，5)-Ara為分支點(diǎn)的α-(1→5)阿拉伯聚糖。
　　最后對純化后的8種果膠進(jìn)行抗腫瘤活

8、性評價，在HUVEC細(xì)胞遷移抑制實(shí)驗(yàn)中，RG-Ⅰ區(qū)域含量最高(80％)的DGP抑制率最高，同時具有良好的提高巨噬細(xì)胞吞噬能力的免疫活性。對ZMAP進(jìn)行酸降解，與ZMAP相比，其RG-Ⅰ部分對HUVEC細(xì)胞遷移的抑制率升高，主鏈HG部分提高巨噬細(xì)胞吞噬能力的活性明顯提高，初步表明果膠的不同結(jié)構(gòu)域具有不同的抗腫瘤機(jī)制。預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)ZCAP可以與成纖維細(xì)胞生長因子FGF-8、10，表皮生長因子EGF和血管內(nèi)皮生長因子VEGF結(jié)合，推測AGA區(qū)域