北蒼術(shù)多糖的提取、性質(zhì)及抗腫瘤活性研究.pdf

1、目的：
　　本文對(duì)北蒼術(shù)多糖的提取、分離純化工藝進(jìn)行了優(yōu)選，并對(duì)其單糖組成、抗腫瘤活性進(jìn)行了初步探測(cè)。研究了純化后的北蒼術(shù)多糖的部分物理化學(xué)性質(zhì)，分子量，糖醛酸含量、單糖組成及其連接方式，為北蒼術(shù)多糖的規(guī)?；a(chǎn)及臨床應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.以北蒼術(shù)多糖的含量和純度為指標(biāo)考察了半纖維素酶、纖維素酶、果膠酶及其復(fù)合酶法輔助超聲提取對(duì)北蒼術(shù)多糖提取率的影響，優(yōu)選出最佳的酶組合。利用正交試驗(yàn)考察酶解溫度、酶

2、解時(shí)間、酶解pH及料液比對(duì)北蒼術(shù)多糖含量的影響，優(yōu)選出最佳酶解工藝。
　　2.以北蒼術(shù)多糖損失率，脫蛋白率為指標(biāo)，考察 Sevag法、三氯乙酸法、木瓜蛋白酶酶解-三氯乙酸法及三氯乙酸-正丁醇法對(duì)北蒼術(shù)多糖脫蛋白的影響。通過DEAE-Sepharose Fast Flow柱層析和Sephadex-150凝膠柱層析進(jìn)行分離純化，得到北蒼術(shù)精制多糖。
　　3.通過間羥基連苯法測(cè)定糖醛酸的含量，并通過紅外光譜（IR），凝膠滲透色譜，

3、氣質(zhì)聯(lián)用（GC-MS）對(duì)所得北蒼術(shù)精制多糖進(jìn)行了性質(zhì)、分子量和組成分析的研究。并采用MTT法測(cè)定北蒼術(shù)多糖對(duì)卵巢癌細(xì)胞株Skov3細(xì)胞增殖的抑制作用，臺(tái)盼藍(lán)法測(cè)定北蒼術(shù)多糖對(duì) Hela細(xì)胞、肝癌細(xì)胞株 hepg2及7721的影響。
　　結(jié)果：
　　1.酶法輔助超聲提取北蒼術(shù)多糖的最佳酶解組合為纖維素酶與果膠酶（比例為1:1），最佳酶解工藝為酶用量為藥材的1.2％（g/g），在 pH5、50℃條件下酶解50min，在此條件下，

4、北蒼術(shù)多糖的提取率是32.29％，遠(yuǎn)高于不酶解的對(duì)照組（高出48.66%）。DEAE-Sepharose Fast Flow柱層析法及SephadexG-150凝膠柱層析法分離均得到一個(gè)單一組分，經(jīng)苯酚-濃硫酸法測(cè)定其純度達(dá)92.68%。
　　2.實(shí)驗(yàn)所得北蒼術(shù)精制多糖為均一組分，白色粉末，易溶于水，其多糖含量為92.68%，蛋白質(zhì)含量為0.8%，粗多糖和精制多糖糖醛酸含量分別為4.36%和4.07%，分子量為11171Da。紅外

5、光譜顯示出多糖的特征峰。GC-MS測(cè)定其僅有果糖組成，并以2→1方式連接。
　　3.北蒼術(shù)多糖對(duì)卵巢癌細(xì)胞株skov3、人宮頸癌Hela細(xì)胞、肝癌細(xì)胞株hepg2及7721增殖均有明顯的抑制作用，尤其是對(duì)肝癌細(xì)胞株hepg2增殖的抑制率達(dá)87.40%。
　　結(jié)論：
　　在本實(shí)驗(yàn)研究中，采用不同的酶對(duì)北蒼術(shù)藥材進(jìn)行酶解后以超聲提取北蒼術(shù)多糖，以多糖的含量和純度為指標(biāo)，進(jìn)行酶解北蒼術(shù)工藝的初探。經(jīng)過篩選，選定纖維素酶與果膠

6、酶（比例為1:1）為北蒼術(shù)的酶解方法。并以該方法輔助超聲提取北蒼術(shù)多糖，考察了酶解溫度，酶解時(shí)間、酶解pH及料液比對(duì)北蒼術(shù)多糖含量的影響。
　　在此條件下，北蒼術(shù)多糖的提取率為32.29%，遠(yuǎn)高于不酶解的對(duì)照組（比直接超聲法高出48.66%），條件穩(wěn)定且重現(xiàn)性好。本實(shí)驗(yàn)選取的脫蛋白方法為TCA法，在此方法下脫蛋白后的北蒼術(shù)多糖含量高，損失少。脫蛋白后的北蒼術(shù)多糖經(jīng)DEAE陰離子交換柱和Sephadex-G150凝膠柱純化后為單一峰

7、，多糖純度高達(dá)92.68%，GC-MS法測(cè)定其由果糖(98.2%)和少量的葡萄糖(1.8%)組成，并以2→1方式連接。綜合甲基化及NMR圖譜分析結(jié)果，ACPS的結(jié)構(gòu)可以表示如下：
　　α-D-Glcp-(1→2)-[β-D-Fruf-(1→2)-β-D-Fruf-]n-(1→2)-β-D-Fruf，其對(duì)對(duì)人卵巢癌細(xì)胞株Skov3、肝癌細(xì)胞株hepg2及7721、宮頸癌Hela細(xì)胞的增殖均有一定的抑制作用。本研究為擴(kuò)大其臨床應(yīng)用范圍