基于發(fā)芽劑與羥自由基協(xié)同作用的芽胞滅活技術(shù)研究.pdf

1、細(xì)菌芽胞對(duì)干燥、射線、生物酶、毒性化學(xué)物質(zhì)、熱力等理化因子具有很強(qiáng)的抵抗力。這種抗力主要是歸結(jié)于其具有堅(jiān)實(shí)的殼質(zhì)結(jié)構(gòu)、能夠與核酸緊密結(jié)合的α/β-酸溶性小分子芽胞蛋白以及能夠與蛋白質(zhì)緊密結(jié)合的吡啶二羧酸鈣(Ca-DPA)成分。與其相應(yīng)的繁殖體相比，細(xì)菌芽胞對(duì)理化因素的抵抗作用增長(zhǎng)了10-75倍。因此，在生物防護(hù)技術(shù)研究中，探索并建立可靠、低污染型的現(xiàn)場(chǎng)凈化技術(shù)是一項(xiàng)迫切任務(wù)。
　　 本課題引入透射電鏡、熒光分辨、共聚焦掃描、微生

2、物活菌計(jì)數(shù)和動(dòng)物毒性試驗(yàn)等技術(shù)手段，觀察L-丙氨酸發(fā)芽劑的生物效應(yīng)以及與羥自由基(·OH)協(xié)同作用滅活類炭疽芽胞的效果。研究結(jié)果如下：
　　 1.經(jīng)最適條件的發(fā)芽劑L-丙氨酸作用，電鏡下可見(jiàn)發(fā)芽20min時(shí)的芽胞核心密度降低，核心與皮質(zhì)、皮質(zhì)與外壁之間界限模糊，芽胞外壁和芽胞衣有破裂，通透性增加；30min時(shí)的芽胞皮質(zhì)消失，細(xì)胞膜基本完全形成，核與胞制質(zhì)融合。
　　 2.在發(fā)芽過(guò)程中，隨著發(fā)芽時(shí)間的增加，發(fā)芽體對(duì)DAPI

3、 熒光的攝入增多，染熒光強(qiáng)度不斷增加，顯示菌體中核酸的活性和含量不斷增加。
　　 3．在發(fā)芽過(guò)程中，芽胞DPA不斷流出，與元素鋱(Ⅲ)形成的復(fù)合物(Tb3+-DPA)，在波長(zhǎng)545nm 處有強(qiáng)長(zhǎng)效熒光。
　　 4．芽胞對(duì)單純的H2O2溶液有明顯的抗力，經(jīng)濃度為1.00mol的H2O2溶液作用60min時(shí)只能達(dá)到0.084個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)的殺滅效果。但發(fā)芽體抗力明顯下降，相同濃度和作用時(shí)間殺滅數(shù)量達(dá)到1.229個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)。
　

4、　 5.在羥自由基(·OH)反應(yīng)體系中， H2O2/Fe2+濃度、比例、Ph、作用時(shí)間、反應(yīng)溫度等是重要的殺滅發(fā)芽體的影響因素，其中，H2O2/Fe2+9:1，酸性Ph 環(huán)境，30℃以上作用溫度，30min 以上作用時(shí)間有高滴度的殺滅效果。
　　 6.以發(fā)芽處理→堿性溶液協(xié)同處理→酸性溶液中和→羥自由基氧化的聯(lián)合作用程序可使類炭疽芽胞的滅活達(dá)到5.020個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)；電鏡下核膜結(jié)構(gòu)模糊，核心溶解，大多數(shù)菌體已成空殼，芽胞菌體殼質(zhì)斷