魔芋甘露聚糖肽中氨基酸指紋圖譜研究.pdf

1、甘露聚糖肽是一類(lèi)我國(guó)首創(chuàng)的生物反應(yīng)修飾物，具有提高機(jī)體免疫力、抗貧血、抗腫瘤等作用。目前市售甘露聚糖肽系從正常人咽喉部分離的α-溶血性鏈球菌33＃菌株經(jīng)深層發(fā)酵培養(yǎng)、提取制得的一種多糖肽類(lèi)物質(zhì)。甘露聚糖肽經(jīng)水解后可產(chǎn)生游離的氨基酸，因此可通過(guò)檢測(cè)氨基酸指紋圖譜來(lái)反映其質(zhì)量。另一方面，魔芋飛粉為魔芋精粉加工過(guò)程中的副產(chǎn)物，質(zhì)量輕、顆粒小，大約占魔芋粉質(zhì)量的38％?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)魔芋飛粉中含有豐富的糖類(lèi)、蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、纖維素等多種類(lèi)型的化合

2、物，具有很高的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值，可作為生產(chǎn)甘露聚糖肽的良好來(lái)源。
　　本研究采用高效液相色譜法建立了魔芋甘露聚糖肽氨基酸的指紋圖譜，以便為魔芋飛粉的深度開(kāi)發(fā)利用及甘露聚糖肽的生產(chǎn)與質(zhì)量控制提供參考。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　以陜西不同產(chǎn)地共10批魔芋飛粉為原料，制備甘露聚糖肽。首先采用酶解法將魔芋糖蛋白酶解為魔芋糖肽，再用Sevage試劑法對(duì)糖肽粗提液進(jìn)行脫雜肽處理，最后用DEAE-52纖維素和葡聚糖凝膠G-100柱層析分離。結(jié)果表明

3、，以酪蛋白磷酸肽為標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程為y=0.992x﹢0.00233，R2=0.9995，線性關(guān)系良好。10批魔芋糖肽脫雜肽后，經(jīng)計(jì)算多肽得率范圍為13.96%~14.71%。最后收集經(jīng)DEAE-52纖維素柱層析后位于第29-42管之間的洗脫液，以及經(jīng)SephadexG-100柱層析后第7-12管之間和第22-34管之間的洗脫液，即可分離得到魔芋甘露聚糖肽。
　　針對(duì)10批魔芋甘露聚糖肽建立了氨基酸指紋圖譜。采用柱

4、前衍生高效液相色譜法，以異硫氰酸苯酯（PITC）作為衍生試劑，流動(dòng)相:（A）乙腈-水（60∶40）、（B）0.1mol/L醋酸鈉-乙腈（93∶7，用乙酸調(diào)pH至5.9），色譜柱為Diamonsil C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；柱溫30℃；流速1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)254nm；進(jìn)樣量20μL；檢測(cè)時(shí)間40min；按梯度洗脫。結(jié)果表明，同一供試品共有峰保留時(shí)間和峰面積均無(wú)明顯變化，RSD均小于3%，說(shuō)明試驗(yàn)儀器精

5、密度良好，方法重現(xiàn)性良好，供試品溶液在24h內(nèi)呈現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性。采用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行分析，相似度均在0.9以上，表明10批魔芋甘露聚糖肽指紋圖譜有良好的相似性。共檢測(cè)出12個(gè)共有特征峰，分別為絲氨酸、甘氨酸、精氨酸、丙氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴(lài)氨酸。
　　為了與魔芋甘露聚糖肽的質(zhì)量進(jìn)行比較，本文參照《中藥注射劑指紋圖譜的技術(shù)要求（暫行）》的標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)甘露聚糖肽注射液中