蒙頂甘露ISSR-DNA指紋圖譜的初步構(gòu)建.pdf

1、蒙頂甘露產(chǎn)自四川省雅安市蒙頂山，作為傳統(tǒng)名茶和歷代貢茶的蒙頂甘露因其獨特的品質(zhì)而享譽世界，“若教陸羽持公論，應(yīng)是人間第一茶”的贊賞，就足以突顯人們對蒙頂甘露品質(zhì)特點的認(rèn)可，然而在茶葉市場巨大利益的誘惑下，冒名頂替歷史名茶的現(xiàn)象愈演愈烈，普通消費者又無法辨認(rèn)，因此蒙頂甘露茶成茶的身份特征信息研究迫在眉睫。
　　本研究優(yōu)化蒙頂甘露基因組DNA提取和ISSR-PCR反應(yīng)體系、引物篩選等，初步建立了適用于蒙頂甘露的DNA指紋圖譜庫，繼而剖

2、析指出蒙頂甘露成茶身份特征信息的分布區(qū)域。本研究主要結(jié)果如下:
　　(1)蒙頂甘露ISSR-PCR最佳反應(yīng)程序為:25μL反應(yīng)體系中含有30ng模板DNA,0.3μmol/L引物，12.5μL2×Master Mix(0.05units/μl Taq DNA Polymerase;4mMMgCl2;0.4mM dNTPs(dATP，dCTP，dGTP，dTTP)），最佳擴增程序為:94℃預(yù)變性5min，94℃變性45s，退火1mi

3、n，72℃延伸1min，35次循環(huán)，最后72℃延伸10min，12℃保存。
　　(2)從65條隨機引物中篩選出12條多態(tài)性高、重復(fù)性好、條帶清晰的ISSR引物對35份蒙項甘露樣品進行指紋分析，多態(tài)性條帶占總數(shù)的98.5％，每條引物平均擴增17.1條，引物擴增多態(tài)性豐富。
　　(3)采用ISSR標(biāo)記對35份蒙頂甘露進行指紋分析。使用核心引物組合法(R17、R20、R22、R23和U844為核心引物，R7、R14、R26、R34

4、、R38、R42、U836為擴展輔助引物）初步構(gòu)建了蒙頂甘露的指紋圖譜庫，指紋圖譜分析得出，蒙頂甘露成茶身份特征信息主要分布在在250bp-1000bp之間。
　　(4)利用已知蒙頂甘露成茶特征信息檢驗得出其指紋信息在本研究結(jié)果之內(nèi)，表明本研究采用ISSR標(biāo)記構(gòu)建蒙頂甘露DNA指紋圖譜是可行的。
　　(5)蒙頂甘露快速鑒定分析得出引物混合會造成條帶缺失，出現(xiàn)非特異性擴增;而PCR產(chǎn)物混合則完好地保存了各PCR產(chǎn)物的信息，相同