海洋微生物次級代謝產(chǎn)物1403-B抗腫瘤活性篩選及機制研究.pdf

1、海洋微生物種類高達100萬種以上，其代謝產(chǎn)物的多樣性也是陸地微生物無法比擬的。醌類化合物是一類廣泛存在的小分子化合物，如蒽環(huán)類抗生素、表阿霉素、柔紅霉素、紫草素、大黃酚、維生素K3等，它們具有多種生物活性。隨著人們對海洋微生物代謝產(chǎn)物研究的深入，一些結(jié)構(gòu)新穎且活性良好的醌類化合物從海洋微生物代謝產(chǎn)物中被分離出來。
　　 紅樹是一種陸地向海洋過渡的特殊群落，特殊的生存環(huán)境，使其微生物代謝產(chǎn)物具有不同于陸地產(chǎn)物的特點。本文所研究的1

2、403-B是從海洋紅樹內(nèi)生真菌次級代謝產(chǎn)物中分離出的新化合物，屬醌類，對腫瘤細胞有抑制生長的作用。
　　 研究目的:
　　 本研究主要是找尋1403-B抑制生長作用明顯的腫瘤細胞，初步探討機制，為臨床抗腫瘤提供候選藥物。
　　 研究內(nèi)容與結(jié)果:
　　 一、1403-B對不同來源腫瘤細胞生長抑制作用的研究
　　 采用MTT法檢測不同來源的腫瘤細胞，在不同濃度1403-B(2.5μmol/L、5.0μ

3、mol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L)處理48h后細胞的存活情況，結(jié)果如下：
　　 1.1 1403-B抑制鼻咽癌細胞株HONE-1的生長
　　 MTT實驗表明，用2.5μmol/L、5.0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L1403-B處理鼻咽癌細胞株HONE-148h后，細胞存活率分別為124.3％±18.6％、120.6％±10.1％、88.6％±12.1％

4、、62.1％±5.4％、54.1％±2.1％，當1403-B為20μmol/L時，與對照組相比，存活率有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，半數(shù)抑制率(IC50)為35.7μmol/L。
　　 1.2 1403-B抑制鼻咽癌細胞株CNE-2的生長
　　 MTT實驗表明，用2.5μmol/L、5.0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L1403-B處理鼻咽癌細胞株CNE-248h后，細胞存活率分別為86

5、.6％±12.1％、83.2％±9.0％、67.8％±6.4％、61.3％±9.8％、42.0％±18.7％，當1403-B為10μmo/L時，與對照組相比，存活率有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，半數(shù)抑制率(IC50)為35.6μmol/L。
　　 1.3 1403-B抑制鼻咽癌細胞株5-8F的生長
　　 MTT實驗表明，用2.5μmol/L、5.0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L1403

6、-B處理鼻咽癌細胞株5-8F48h后，細胞存活率分別是112.4％±4.8％、108.9％±4.5％、102.8％±6.4％、62.1％±4.9％、38.5％±1.4％，當1403-B為20μmol/L時，與對照組相比，存活率有顯著統(tǒng)計學差異(P＜0.01)，半數(shù)抑制率(IC50)為31.7μmol/L。
　　 1.4 1403-B抑制肺癌細胞A549的生長
　　 MTT實驗表明，用2.5μmol/L、5.0μmol/L

7、、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L1403-B處理肺癌細胞株A54948h后，細胞存活率分別為71.3％1.9％、68.1％±1.4％、54.6％±3.0％、34.7％±3.9％、19.9％±0.2％，當1403-B為2.5μmol/L時，與對照組相比，存活率有顯著統(tǒng)計學差異(P＜0.01)，半數(shù)抑制率(IC50)為20.0μmol/L。
　　 1.5 1403-B抑制肝癌HepG2的細胞生長
　　

8、MTT實驗表明，用2.5μmol/L、5.0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L1403-B處理肝癌細胞株HepG248h后，細胞存活率分別為68.6％±14.8％、71.5％±3.9％、54.9％±10.4％、36.2％±5.9％、24.5％±3.0％，當1403-B為2.5μmol/L時，與對照組相比，存活率有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，半數(shù)抑制率(IC50)為13.3μmol/L。
　　 1.

9、6 1403-B抑制肝癌細胞B7402的生長
　　 MTT實驗表明，用2.5μmol/L、5.0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L1403-B處理肝癌細胞株B740248h后，細胞存活率分別是90.3％±5.7％、74.8％±3.0％、67.9％±10.2％、45.1％±2.1％、37.1％±0.8％，當1403-B為5.0μmol/L時，與對照組相比，存活率有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，半數(shù)抑制

10、率(IC50)為19.8μmol/L。
　　 1.7 1403-B抑制視網(wǎng)膜母細胞瘤細胞Rb的生長
　　 MTT實驗表明，用2.5μmol/L、5.0μmo/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L1403-B處理視網(wǎng)膜母細胞瘤Rb48h后，細胞存活率分別為84.6％±1.4％、69.8％±4.3％、67.0％±2.5％、58.7％±1.8％、53.1％±0.5％，當1403-B為2.5μmol/L時，與

11、對照組相比，存活率有顯著統(tǒng)計學差異(P＜0.01)，半數(shù)抑制率(IC50)為44.0μmol/L。
　　 1.8 1403-B抑制前列腺癌細胞PC3的生長
　　 MTT實驗表明，用2.5μmol/L、5.0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L1403-B處理前列腺癌細胞PC348h后，細胞存活率分別為87.6％±3.3％、76.7％±6.0％、69.3％±3.6％、49.1％±3.4％、14

12、.5％±0.9％，當1403-B為2.5μmol/L時，與對照組相比，存活率有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，半數(shù)抑制率(IC50)為21.1μmol/L。
　　 1.9 1403-B抑制胃癌細胞SGC7901的生長
　　 MTT實驗表明，用2.5μmol/L、5.0μmol/L、10μmo/L、20μmol/L、40μmol/L1403-B處理胃癌細胞SGC790148h后，細胞存活率分別為51.5％±7.7％、39.7％

13、±9.3％、16.1％±3.3％、12.2％±0.2％、3.5％±0.7％，當1403-B為5.0μmol/L時，與對照組相比，存活率有顯著統(tǒng)計學差異(P＜0.01)，半數(shù)抑制率(IC50)為3.8μmol/L。
　　 二、1403-B對正常細胞生長抑制作用的研究
　　 采用MTT法檢測不同濃度1403-B(2.5μmol/L、5.0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L)處理48h后，正常肝

14、細胞系和原代培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞的存活情況，結(jié)果如下：
　　 2.1 1403-B對正常肝細胞系生長的抑制作用
　　 MTT實驗表明，用2.5μmol/L、5.0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L1403-B處理正常肝細胞系Chang liver cells48h后，細胞存活率分別為106.1％±6.6％、96.4±0.7、67.1％±1.6％、40.4％±0.6％、27.7％±1.6

15、％，當1403-B為10μmol/L時，與對照組相比，存活率有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，半數(shù)抑制率(IC50)為17.5μmol/L。
　　 2.2 1403-B對原代培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞生長的抑制作用
　　 MTT實驗表明，用2.5μmol/L、5.0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L1403-B處理原代培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞HUVEC48h后，細胞存活率分別為90.4％±8.1％、

16、98.1％±3.9％、82.1％±1.0％、43.3％±5.0％、26.1％±1.3％，當1403-B為10μmol/L時，與對照組相比，存活率有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，半數(shù)抑制率(IC50)為22.4μmol/L。
　　 三、1403-B對腫瘤細胞及正常細胞的半數(shù)抑制率
　　 由統(tǒng)計學軟件，根據(jù)實驗結(jié)果，計算出1403-B對各種實驗細胞的半數(shù)抑制率(IC50)。結(jié)果表明，1403-B對SGC7901的半數(shù)抑制率遠遠

17、低于其對正常細胞的半數(shù)抑制率。
　　 四、1403-B誘導胃癌細胞SGC7901凋亡
　　 4.1 1403-B誘導SGC7901細胞凋亡的形態(tài)學變化
　　 Hochest33342染色觀察細胞形態(tài)，熒光顯微鏡下，細胞隨藥物濃度增高逐漸出現(xiàn)核皺縮、染色質(zhì)濃集、核碎裂等典型凋亡形態(tài)變化。
　　 4.2 1403-B劑量依賴性誘導SGC7901細胞凋亡
　　 Annexin V/PI凋亡細胞流式計數(shù)，

18、說明1403-B呈劑量依賴性誘導胃癌細胞SGC7901凋亡。
　　 五、1403-B誘導胃癌細胞凋亡的機制研究
　　 結(jié)論及研究意義:
　　 1.發(fā)現(xiàn)了一種新型海洋來源抗腫瘤化合物。
　　 2.該化合物對胃癌細胞SGC7901具有明顯的生長抑制作用，半數(shù)抑制率遠遠低于對正常細胞的抑制作用，為胃癌的治療提供了候選藥物。
　　 3.證明1403-B通過激活線粒體凋亡通路和死亡受體通路誘導胃癌細胞凋亡。