轉(zhuǎn)錄因子GmPHR1和OsPHR2轉(zhuǎn)化大豆及其轉(zhuǎn)基因新材料創(chuàng)制.pdf

1、本研究比較了農(nóng)桿菌介導(dǎo)子葉節(jié)、胚尖、下胚軸、莖尖外植體在不定芽誘導(dǎo)率、植株再生率、抗生素敏感性及基因轉(zhuǎn)化效率等方面的差異;通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法和花粉管通道技術(shù)將耐低磷相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子GmPHR1和OsPHR2轉(zhuǎn)化大豆,獲得大豆轉(zhuǎn)基因材料,并對(duì)轉(zhuǎn)OsPHR2大豆新材料的耐低磷特性進(jìn)行評(píng)價(jià)。研究結(jié)果為大豆相對(duì)穩(wěn)定、高效率的轉(zhuǎn)化體系建立及作物轉(zhuǎn)基因育種提供參考和技術(shù)支撐,為大豆耐低磷新品種的培育提供優(yōu)異新材料。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.通

2、過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)大豆不同外植體遺傳轉(zhuǎn)化研究,明確了以莖尖和胚尖為外植體的轉(zhuǎn)化系統(tǒng)是目前較為理想的轉(zhuǎn)化系統(tǒng)。在子葉節(jié)、下胚軸、胚尖、莖尖轉(zhuǎn)化系統(tǒng)中,以莖尖轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的不定芽誘導(dǎo)率、植株再生率和轉(zhuǎn)化效率最高,且對(duì)基因型的依賴(lài)性最小,遺傳轉(zhuǎn)化周期最短,但對(duì)抗生素的敏感性較差;其次以胚尖轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的不定芽誘導(dǎo)率、植株再生率和轉(zhuǎn)化效率較高,對(duì)基因型的依賴(lài)性較小,遺傳轉(zhuǎn)化周期較短,同時(shí)對(duì)抗生素的敏感性較強(qiáng)。
　　 2.通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將轉(zhuǎn)錄因子Gm

3、PHR1和OsPHR2導(dǎo)入大豆,獲得了轉(zhuǎn)基因大豆。GmPHR1轉(zhuǎn)化大豆品種冀豆12,獲得了9份(1個(gè)株系)轉(zhuǎn)PBI121-GmPHR1T4代和23份(9個(gè)株系)Px6-GmPHR1T2代陽(yáng)性材料;OsPHR2轉(zhuǎn)化大豆品種冀豆12,獲得了78份(12個(gè)株系)轉(zhuǎn)OsPHR2T3代陽(yáng)性材料,經(jīng)RT-PCR檢測(cè)證明目的基因在RNA水平表達(dá)。
　　 3.通過(guò)花粉管通道技術(shù)將轉(zhuǎn)錄因子GmPHR1轉(zhuǎn)化大豆,獲得了轉(zhuǎn)GmPHR1的轉(zhuǎn)基因大豆,并

4、明確了中黃41、綏農(nóng)14和冀豆3號(hào)是轉(zhuǎn)化后結(jié)莢率較高的品種。將Px6-GmPHR1轉(zhuǎn)化大豆,獲得了2份冀豆12(1個(gè)株系),4份綠75(4個(gè)株系)T2代陽(yáng)性材料;同時(shí)發(fā)現(xiàn)中黃41、綏農(nóng)14、冀豆3號(hào)和合豐35等大豆品種轉(zhuǎn)化后結(jié)莢率較高,并獲得了706粒含GmPHR1無(wú)載體、無(wú)標(biāo)記線(xiàn)性片段的轉(zhuǎn)化種子和345粒含轉(zhuǎn)錄因子基因OsPHR2的轉(zhuǎn)化種子。
　　 4.通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)OsPHR2基因大豆新材料的分析以及低磷研究,證明了轉(zhuǎn)基因新材料耐