乳源金葡菌主要腸毒素基因的檢測(cè)、表達(dá)及其抗體制備.pdf

1、金葡菌腸毒素(Staphylococcal Enterotoxin，SE)是引起人類食物中毒和葡萄球菌胃腸炎的主要原因。SE共有18個(gè)基因類型，不同SE基因的檢出率與菌株分離地域和宿主來(lái)源有關(guān)。針對(duì)合肥地區(qū)乳源金葡菌腸毒素基因型分布狀況尚不清楚的現(xiàn)狀，本研究在采用PCR方法檢測(cè)56株合肥分離株10種SE基因，確定其主要基因型的基礎(chǔ)上，利用大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)了主要腸毒素SEA和SEG蛋白，并制備了其特異性抗體。研究結(jié)果為進(jìn)一步建

2、立金葡菌腸毒素的免疫學(xué)檢(監(jiān))測(cè)方法奠定了基礎(chǔ)，對(duì)保障乳制品的安全，防止SE食物中毒具有一定指導(dǎo)意義。
　　 為了明確合肥地區(qū)乳源金葡菌腸毒素基因型的分布狀況，根據(jù)GenBank中收錄的各型SE基因序列(SEA、SEB、SEC、SED、SEE、SEG、SEH、SEI、SEM和SEN)，設(shè)計(jì)10對(duì)特異性引物，對(duì)56株乳源金葡菌合肥分離株進(jìn)行10種SE基因PCR檢測(cè)。結(jié)果顯示56株測(cè)試菌中有53株攜帶SE基因，總攜帶率為94.64％

3、，各型腸毒素基因的攜帶率分別為SEA41.07％、SEB16.07％、SEC19.64％、SED3.57％、SEG91.07％、SEH5.36％、SEI17.86％、SEM5.36％和SEN24.43％，未檢測(cè)到SEE基因。SE陽(yáng)性菌株可同時(shí)攜帶兩種或兩種以上的SE基因，共組成49種腸毒素基因型，但以SEA-SEG為其主要腸毒素基因型。結(jié)果提示，應(yīng)建立一種敏感、快速和特異的免疫學(xué)方法，加強(qiáng)對(duì)合肥地區(qū)原料乳中SEA和SEG的檢(監(jiān))測(cè)。<

4、br>　　 為了獲得SEA和SEG蛋白檢測(cè)原和免疫原，根據(jù)金葡菌ATCC25923的SEA和SEG基因序列，設(shè)計(jì)2對(duì)特異性引物，PCR擴(kuò)增出全長(zhǎng)SEA基因(774bp)和切除信號(hào)肽的SEG基因(702bp)。分別將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物克隆至pAML-c4X質(zhì)粒，構(gòu)建出原核表達(dá)重組質(zhì)粒pAML-c4X-SEA和pAML-c4X-SEG。誘導(dǎo)表達(dá)的可溶性重組蛋白經(jīng)親和層析柱純化后，得到純度分別為98.32％和97.69％、濃度分別為1.0mg/