大腸桿菌腸毒素卵黃抗體的制備及其抗毒素特性研究.pdf

1、產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌（Enterotoxigenic E.coli簡稱ETEC）是引起仔豬腹瀉的主要病原之一。在家畜中，尤以初生幼畜特別易感，并引起生長發(fā)育遲緩，生產(chǎn)能力低下，甚至造成死亡，給畜牧業(yè)造成很大損失。仔豬腹瀉的發(fā)生與大腸桿菌的腸毒素LT和ST有密切的關(guān)系。目前，對(duì)該病的防治主要采用大腸桿菌多價(jià)疫苗免疫和藥物防治，但防治效果均不理想。卵黃抗體作為一類高效特異性生物制劑在防治仔豬腹瀉中顯示出明顯的效果，為該病的防治開辟了新的途徑。

2、
　　 本研究擴(kuò)增了不耐熱腸毒素(LT)B亞基基因liB及含有18個(gè)氨基酸的耐熱腸毒素(ST1a)st1a的核苷酸序列，用linker連接后分別插入pET-28a-sumo、pET-32a、PHUE、pCold(I)、PGEX-6P-1等五種表達(dá)載體。構(gòu)建帶有HA標(biāo)簽的重組表達(dá)載體:將ltB基因與HA標(biāo)簽基因相連后插入pET-28a-sumo。經(jīng)表達(dá)條件優(yōu)化，獲得重組蛋白LTB-ST1a和重組蛋白LTB-HA。將表達(dá)的LTB-S

3、T1a蛋白作為免疫原對(duì)8只8月齡海蘭褐蛋雞進(jìn)行免疫。共進(jìn)行3次免疫，每次間隔2周。一免時(shí)，免疫劑量為0.4mg/ml，每只雞注射1ml。二免時(shí)，免疫劑量為0.6mg/ml，每只雞注射1ml。三免時(shí)，免疫劑量為0.8mg/ml，每只雞注射1ml。
　　 二免后3d收蛋，用氯仿抽提法提取卵黃抗體，間接ELISA法檢測抗體效價(jià)。以重組蛋白LTB-HA為包被抗原檢測卵黃抗體中抗LTB的效價(jià)。用實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建菌株表達(dá)的4ST1a蛋白為包被抗原

4、檢測卵黃抗體中的ST1a的效價(jià)。結(jié)果顯示，抗LTB的多抗的ELISA效價(jià)最高值為1∶9192，抗ST1a的多抗的ELISA效價(jià)最高值為1∶512。兩種抗體的效價(jià)消長趨勢相同，均在二免前后達(dá)到了最高峰，三免時(shí)降低，三免后效價(jià)逐步上升。用3只家兔進(jìn)行的LT毒素中和實(shí)驗(yàn)（腸袢結(jié)扎實(shí)驗(yàn)）結(jié)果顯示，卵黃抗體濃縮液與LT毒素1∶1混合時(shí)，可以中和LT毒素的毒性作用，2倍稀釋的卵黃抗體濃縮液不能完全中和毒素，4倍稀釋的卵黃抗體濃縮液不能中和毒素。3組