槐糖的提取純化及其用于間型脈孢菌產(chǎn)纖維素酶的誘導(dǎo)研究.pdf

1、本工作研究了間型脈孢菌(Neurospora intermedia)固體發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶條件及酶學(xué)性質(zhì),以CMC酶、濾紙酶活力和β-葡萄糖苷酶為主要參考指標(biāo),結(jié)果表明:以麩皮米糠為碳源且比例為1:1,硫酸銨的濃度為3％,料液比為1:1.5時(shí)為最佳產(chǎn)酶培養(yǎng)基,在初始pH值為7.0,溫度為34℃,培養(yǎng)時(shí)間為108h的條件下纖維素酶活力較高,CMC酶活、濾紙酶活和β-葡萄糖苷酶活值大小分別為668.0U/g、162.5U/g和939.5U/g,

2、該微生物所產(chǎn)β-葡萄糖苷酶反應(yīng)最適溫度為55-60℃,最適pH值為4.5-5.0。得到固體酶制劑對(duì)葡萄糖和蔗糖有明顯的水解及異構(gòu)化作用。
　　 探索了綠色木霉和間型脈孢菌混合液體發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的規(guī)律,結(jié)果表明間型脈孢菌遲于綠色木霉菌24小時(shí)接種且接種量為1:1時(shí)為最優(yōu)產(chǎn)酶組合,此時(shí)CMC酶活值最大為96.3U/mL,高于其它產(chǎn)酶形式組合和單一菌株條件。對(duì)于濾紙酶混合發(fā)酵相比于兩種菌的單一發(fā)酵,其酶周期延遲了1天,其產(chǎn)酶的高峰為第

3、5天,此時(shí)其酶活為22.8U/mL,峰值均大于單一發(fā)酵的峰值。
　　 對(duì)槐角中的黃酮類物質(zhì)進(jìn)行了初步分離提取,測(cè)得所提取的產(chǎn)品中總黃酮和總異黃酮含量分別為61.3％和21.6％；測(cè)得槐角中槐糖(以干重計(jì))的含量為0.52％,采用LC-MS技術(shù)初步鑒定出了山奈酚、槐角苷、染料木苷和染料木素。
　　 研究了從甜菊苷中提取與純化槐糖。以槐糖水解得率為目的,采用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化水解條件得到槐糖最佳酸水解條件為:粗品濃度為1％,硫酸濃

4、度為0.3N,提取時(shí)間為60min.此條件下槐糖水解得率可達(dá)34.1％。用活性炭柱層析對(duì)甜菊苷水解液進(jìn)行了槐糖的分離與純化,目標(biāo)產(chǎn)物經(jīng)LC-MS鑒定為高純度槐糖。
　　 探索了槐糖對(duì)間型脈孢菌產(chǎn)纖維素酶的誘導(dǎo)作用。在以含槐糖(10-2M)的誘導(dǎo)液為碳源時(shí),菌絲體到達(dá)酶活高峰值的誘導(dǎo)時(shí)間為24小時(shí),此時(shí)CMC酶活為46.3U/mL。在脈孢菌的培養(yǎng)過(guò)程中,加誘導(dǎo)物的時(shí)間切入點(diǎn)影響槐糖濃度對(duì)產(chǎn)酶的正誘導(dǎo)效果；第3小時(shí)測(cè)定時(shí),隨著槐糖濃

5、度遞度升高CMC酶值幾乎無(wú)變化且處在一個(gè)較低水平。第18和24小時(shí)測(cè)定時(shí),酶活值隨槐糖濃度的增大而提高,槐糖濃度為10-1M時(shí),其酶活最大值分別為24.7U/mL和68.0U/mL?？梢?jiàn)在只有在一定條件,脈孢菌產(chǎn)CMC酶的能力在條件下隨著誘導(dǎo)槐糖濃度的提高而加強(qiáng)。在控索菌絲體與誘導(dǎo)液持續(xù)接觸的時(shí)間長(zhǎng)短對(duì)隨后酶活值增長(zhǎng)的影響時(shí),結(jié)果表明:第6、12、18時(shí)中途洗去誘導(dǎo)液,它們?cè)诘?4小時(shí)的酶活峰值分別為對(duì)照值的22.1％、43.4％和63