M-112木霉固態(tài)發(fā)酵羊胃容物產(chǎn)木聚糖酶的研究.pdf

1、木聚糖酶（β-1，4-D-endoxylanase，EC3.2.1.8）可將木聚糖降解為低聚木糖和少量的木糖，是一類(lèi)重要的生物酶制劑。目前，木聚糖酶已在許多領(lǐng)域顯示出較高的應(yīng)用潛力。
　　本文首先通過(guò)研究培養(yǎng)基料比、固液比、無(wú)機(jī)鹽、接種量以及培養(yǎng)時(shí)間等單因素對(duì)M-112木霉固態(tài)發(fā)酵羊胃容物的影響，并采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化了固態(tài)發(fā)酵條件。研究表明，M-112木霉固態(tài)發(fā)酵羊胃容物產(chǎn)木聚糖酶是可行的，影響產(chǎn)酶最主要的因素為接種量。優(yōu)化的發(fā)

2、酵條件為胃容物50％，營(yíng)養(yǎng)基料50%（玉米/麥麩=5：5），CaCl2起始濃度0.5%，初始pH5.0，固液比1：3，每10g干培養(yǎng)基接種量2ml(孢子數(shù)1.2～1.6×108cfu/ml)，發(fā)酵時(shí)間72h,發(fā)酵溫度30℃。經(jīng)優(yōu)化后的酶活水平達(dá)到了138.504IU/ml。較已報(bào)道的同種木霉的最高發(fā)酵酶活提高達(dá)3倍左右。
　　其次，將M-112木霉菌固態(tài)發(fā)酵羊胃容物的粗酶提取液，經(jīng)20～60%飽和度的硫酸銨粗分級(jí)分離、Sephad

3、ex G-25脫鹽、 Sephadex G-150到Sephadex G-100分子篩順序純化，通過(guò)蛋白質(zhì)測(cè)定、酶活測(cè)定、SDS-PAGE和底物-PAGE電泳等，證明制備到分子量為64.7KDa的電泳純木聚糖酶，其回收率為5.59%，純化倍數(shù)10.43，比活力為253.36IU/mg。
　　從 M-112木霉菌固態(tài)發(fā)酵羊胃容物中純化的木聚糖酶，經(jīng)性質(zhì)研究表明：其Km=11.20g/L，Vmax=0.70μmol/min；最適溫度為

4、65℃，最適pH為6.0；該酶在中溫條件下穩(wěn)定性好，在65℃酶促反應(yīng)120min，仍有60%以上的木聚糖酶活性；該酶在酸性至弱堿性（pH3.0～8.0）條件下穩(wěn)定性好，在65℃酶促反應(yīng)120min，仍有58%以上的木聚糖酶活性。不同的金屬離子對(duì)木聚糖酶的活性影響不同，Ca2+、Mg2+、Cu2+、Zn2+、Mn2+對(duì)酶有激活作用，其中5～15mmol/L Ca2+的激活作用最大。Fe2+、Fe3+、Ba2+、Al3+對(duì)酶有抑制作用，其中