里氏木霉β-甘露聚糖酶的克隆表達(dá)及結(jié)構(gòu)域的研究.pdf

1、木質(zhì)纖維素生物質(zhì)是一種豐富的可再生資源，然而由于半纖維素與木質(zhì)素將纖維素緊緊的包裹在里面，這種結(jié)構(gòu)導(dǎo)致生物質(zhì)很難被有效利用。目前被廣泛接受的技術(shù)路線就是酶解法，因此本論文針對(duì)一種具有應(yīng)用潛力的半纖維素酶β-甘露聚糖酶，對(duì)其結(jié)構(gòu)功能及協(xié)同纖維素酶的水解能力進(jìn)行探討研究。
　　里氏木霉β-甘露聚糖酶(EC3.2.1.78)由糖苷水解酶GH5家族的催化結(jié)構(gòu)域、Linker區(qū)域和真菌型碳水結(jié)合模塊(CBM)三部分組成。通過(guò)RT-PCR方法

2、得到β-甘露聚糖酶全長(zhǎng)和兩個(gè)截短酶(命名為man1、man1△CBM和man1△LCBM)三種基因片段。Man1和Man1△CBM均能在Pichia pastoris GS115中高效表達(dá)，酶活分別達(dá)到34.5 IU/mL和42.9 IU/mL，而Man1△LCBM酶活卻因Linker和CBM模塊的缺失導(dǎo)致蛋白結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，酶活僅僅為0.36 IU/mL。
　　重組Man1和Man1△CBM具有相似的酶學(xué)性質(zhì)，但在溫度穩(wěn)定性上表現(xiàn)

3、出明顯的差異，當(dāng)在60℃下處理120 h后Man1能夠維持72.7％的酶活力，Man1△CBM則僅能維持47.9％的酶活力。但當(dāng)70℃下處理60 min后，截短酶卻比全長(zhǎng)提高了13.3％。與重組Man1△CBM相比，Man1對(duì)可溶性底物刺槐豆膠和半乳甘露聚糖均表現(xiàn)出相對(duì)低的特異性;而當(dāng)協(xié)助纖維素酶水解纖維素和堿處理的甘蔗渣時(shí)，Man1的添加則體現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢(shì)，尤其在纖維素酶ECⅡ基礎(chǔ)上添加甘露聚糖酶，使還原糖產(chǎn)量分別提高28.54％和2