液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)菜籽ACE抑制肽的研究.pdf

1、菜籽ACE（血管緊張素轉(zhuǎn)化酶）抑制肽是指將菜籽蛋白水解成為3-6個(gè)氨基酸的小肽，它可以通過(guò)抑制ACE的活性來(lái)實(shí)現(xiàn)降血壓作用，相比于合成的ACE抑制劑藥物具有安全性高，副作用少，易吸收的特點(diǎn)，是目前國(guó)內(nèi)外生物活性肽研究的熱點(diǎn)。利用食品級(jí)的枯草芽孢桿菌直接水解菜籽蛋白，可以降低菜籽ACE抑制肽的生產(chǎn)成本，加速菜籽ACE抑制肽的產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程。因此，枯草芽孢桿菌生產(chǎn)菜籽ACE抑制肽是一種具有廣泛應(yīng)用前景的方法，此方法在國(guó)內(nèi)外尚未有相關(guān)報(bào)道。本文進(jìn)

2、行了以下四方面的研究：液態(tài)發(fā)酵法制備菜籽ACE抑制肽菌種的篩選；液態(tài)發(fā)酵的培養(yǎng)基條件優(yōu)化；液態(tài)發(fā)酵的發(fā)酵條件優(yōu)化；菜籽ACE抑制肽的分離純化。研究結(jié)果如下：
　　 ⑴采用枯草芽孢桿菌，地衣芽孢桿菌，黑曲霉，白地霉，產(chǎn)朊假絲酵母，宇佐美曲霉、雅致放射毛霉對(duì)菜籽粕進(jìn)行液態(tài)發(fā)酵，以氮溶解指數(shù)、SN-TCA，氨基酸態(tài)氮、肽得率和ACE抑制活性為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)菜籽ACE抑制肽的菌種進(jìn)行篩選。結(jié)果表明：在上述菌種中枯草芽孢桿菌液態(tài)

3、發(fā)酵所得肽得率最高，并且具有最高的ACE抑制活性，菌種優(yōu)勢(shì)明顯，是液態(tài)發(fā)酵菜籽粕生產(chǎn)ACE抑制肽的優(yōu)勢(shì)菌種。
　　 ⑵以菜籽粕為原料，通過(guò)枯草芽孢桿菌液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)菜籽ACE抑制肽。先以肽得率、ACE抑制率為指標(biāo)通過(guò)單因素試驗(yàn)得到液態(tài)發(fā)酵的培養(yǎng)基條件，再以響應(yīng)面分析法，優(yōu)化枯草芽孢桿菌液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中的3種成分，確定枯草芽孢桿菌發(fā)酵生產(chǎn)菜籽肽的最佳培養(yǎng)基工藝條件為：磷酸二氫鉀0.45%、葡萄糖0.8%、料液比1:23，初始pH7。

4、優(yōu)化后的ACE抑制率理論值可達(dá)69.3%。
　　 ⑶在培養(yǎng)基條件優(yōu)化的基礎(chǔ)上，對(duì)液態(tài)發(fā)酵的工藝條件進(jìn)行了進(jìn)一步的優(yōu)化。先以肽得率、ACE抑制率為指標(biāo)通過(guò)單因素試驗(yàn)得到液態(tài)發(fā)酵的發(fā)酵條件，再以響應(yīng)面法分析法，優(yōu)化了枯草芽孢桿菌液態(tài)發(fā)酵的工藝條件，確定枯草芽孢桿菌液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)菜籽ACE抑制肽的最佳發(fā)酵工藝條件為發(fā)酵時(shí)間，發(fā)酵溫度和接種量，最佳工藝條件分別為20 h、38 ℃和1×108個(gè)/mL。優(yōu)化后的菜籽ACE抑制肽抑制率達(dá)到70

5、.95%。
　　 ⑷將制備得到的菜籽多肽液進(jìn)行超濾膜分離，凝膠色譜分離，離子交換色譜分離和反向高效液相色譜分離，結(jié)果表明：發(fā)酵菜籽肽經(jīng)截留分子量3KD的超濾后，具有較高的ACE抑制性，超濾菜籽肽分別經(jīng)凝膠過(guò)濾色譜分離后，得到5個(gè)主要峰，其中R-D（300da）的ACE抑制活性最高，達(dá)到73.5%，將R-D使用離子交換色譜分離，得到3個(gè)主要峰，其中R-D-B的ACE抑制活性最高，為78.2%，將R-D-B經(jīng)過(guò)反相液相色譜分離后得到