遠(yuǎn)東擬沙丁魚(yú)ACE抑制肽的研究.pdf

1、高血壓及其引起的心血管疾病是引起人類(lèi)死亡的主要病因之一。目前治療高血壓藥物主要是化學(xué)合成的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑（如卡托普利、賴諾普利、福辛普利、西拉普利），雖然這些合成的ACE抑制劑能夠有效降低血壓，但它們同時(shí)也帶來(lái)一些負(fù)面影響（如頭痛、咳嗽、眩暈、疲勞和腹瀉）。近年來(lái)，因?yàn)槭澄镌葱訟CE抑制肽具有安全性并且營(yíng)養(yǎng)高，從而受到了人們青睞。
　　遠(yuǎn)東擬沙丁魚(yú)是東南沿海一種主要的低值海魚(yú)，其蛋白含量高。目前，遠(yuǎn)東擬沙丁魚(yú)大多

2、加工成飼料、肥料，或少部分制成罐頭，資源附加值低。為了提高遠(yuǎn)東擬沙丁魚(yú)的附加值，本課題以遠(yuǎn)東擬沙丁魚(yú)為原料，研究其酶解產(chǎn)物的體外ACE抑制活性及體內(nèi)降血壓效果，并進(jìn)一步分離純化，探索其結(jié)構(gòu)和抑制機(jī)理，主要研究結(jié)果如下:
　　(1)以遠(yuǎn)東擬沙丁魚(yú)肌肉為原材料，采用動(dòng)物蛋白水解酶和風(fēng)味蛋白酶聯(lián)合水解制備其酶解產(chǎn)物(簡(jiǎn)稱為SMMH)，SMMH通過(guò)超濾技術(shù)進(jìn)行分離獲得3個(gè)組分，分別稱為A(MW＞10kDa)、B(3kDa＜MW＜10kDa

3、)和C(MW＜3kDa)。以體外ACE抑制率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，評(píng)估活性，結(jié)果顯示:C的ACE抑制率最大，為71.4％，A的ACE抑制率最低，為34.6％。為了進(jìn)一步評(píng)價(jià)C降血壓效果，以原發(fā)性高血壓大鼠為模型，采用灌胃方式，研究其短期(10h)與長(zhǎng)期(28d)降血壓功效，結(jié)果顯示:C三種劑量對(duì)SHRs大鼠的收縮壓有顯著降低作用，并且隨著劑量的增加，降血壓作用越顯著。
　　(2)為了闡明C中ACE抑制肽結(jié)構(gòu)，研究其ACE抑制肽構(gòu)效關(guān)系，首

4、先利用Sephacryl S-100凝膠色譜柱將C分成了3個(gè)級(jí)份，分別稱為p1、p2和p3，通過(guò)體外ACE抑制活性分析，結(jié)果證明p2具有最強(qiáng)的ACE抑制率為76.1％;然后利用Q-Sepharose Fast Flow離子交換層析柱將級(jí)份p2分成3個(gè)級(jí)份，分別稱為p2-1、p2-2和p2-3，通過(guò)體外ACE抑制活性分析，發(fā)現(xiàn)p2-2具有最強(qiáng)的ACE抑制率為36.2％;最后采用HPLC將p2-2分成5個(gè)級(jí)份，以體外ACE抑制率為指標(biāo)，篩選

5、出ACE抑制活性較高的2個(gè)級(jí)份p2-2-2和p2-2-4，它們的ACE抑制率分別為34.1％和41.6％;為了確定p2-2-2和p2-2-4的結(jié)構(gòu)，采用ESI-MS/MS二級(jí)質(zhì)譜對(duì)其氨基酸序列進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明:p2-2-2氨基酸序列Lys-Val-Glu-Pro-Leu-Pro，IC50是22.9μM，p2-2-4氨基酸序列為Pro-Ala-Leu，IC50是12.2μM。
　　(3)為了進(jìn)一步探索Lys-Val-Glu-Pro

6、-Leu-Pro和Pro-Ala-Leu進(jìn)入體內(nèi)的穩(wěn)定性，將這2種ACE抑制肽模擬體內(nèi)消化系統(tǒng)環(huán)境進(jìn)行水解，結(jié)果表明:Lys-Val-Glu-Pro-Leu-Pro和Pro-Ala-Leu經(jīng)不同pH處理后以及胃腸消化酶水解后其ACE抑制活性沒(méi)有顯著變化(P＞0.05)。探討了Lys-Val-Glu-Pro-Leu-Pro和Pro-Ala-Leu對(duì)ACE的抑制類(lèi)型及其機(jī)制，根據(jù)它們催化合成底物HHL生成馬尿酸的抑制動(dòng)力學(xué)和Linweave