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文檔簡介
1、高血壓及其引起的心血管疾病是引起人類死亡的主要病因之一。目前治療高血壓藥物主要是化學(xué)合成的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑(如卡托普利、賴諾普利、福辛普利、西拉普利),雖然這些合成的ACE抑制劑能夠有效降低血壓,但它們同時也帶來一些負(fù)面影響(如頭痛、咳嗽、眩暈、疲勞和腹瀉)。近年來,因為食物源性ACE抑制肽具有安全性并且營養(yǎng)高,從而受到了人們青睞。
遠(yuǎn)東擬沙丁魚是東南沿海一種主要的低值海魚,其蛋白含量高。目前,遠(yuǎn)東擬沙丁魚大多
2、加工成飼料、肥料,或少部分制成罐頭,資源附加值低。為了提高遠(yuǎn)東擬沙丁魚的附加值,本課題以遠(yuǎn)東擬沙丁魚為原料,研究其酶解產(chǎn)物的體外ACE抑制活性及體內(nèi)降血壓效果,并進(jìn)一步分離純化,探索其結(jié)構(gòu)和抑制機理,主要研究結(jié)果如下:
(1)以遠(yuǎn)東擬沙丁魚肌肉為原材料,采用動物蛋白水解酶和風(fēng)味蛋白酶聯(lián)合水解制備其酶解產(chǎn)物(簡稱為SMMH),SMMH通過超濾技術(shù)進(jìn)行分離獲得3個組分,分別稱為A(MW>10kDa)、B(3kDa<MW<10kDa
3、)和C(MW<3kDa)。以體外ACE抑制率作為評價指標(biāo),評估活性,結(jié)果顯示:C的ACE抑制率最大,為71.4%,A的ACE抑制率最低,為34.6%。為了進(jìn)一步評價C降血壓效果,以原發(fā)性高血壓大鼠為模型,采用灌胃方式,研究其短期(10h)與長期(28d)降血壓功效,結(jié)果顯示:C三種劑量對SHRs大鼠的收縮壓有顯著降低作用,并且隨著劑量的增加,降血壓作用越顯著。
(2)為了闡明C中ACE抑制肽結(jié)構(gòu),研究其ACE抑制肽構(gòu)效關(guān)系,首
4、先利用Sephacryl S-100凝膠色譜柱將C分成了3個級份,分別稱為p1、p2和p3,通過體外ACE抑制活性分析,結(jié)果證明p2具有最強的ACE抑制率為76.1%;然后利用Q-Sepharose Fast Flow離子交換層析柱將級份p2分成3個級份,分別稱為p2-1、p2-2和p2-3,通過體外ACE抑制活性分析,發(fā)現(xiàn)p2-2具有最強的ACE抑制率為36.2%;最后采用HPLC將p2-2分成5個級份,以體外ACE抑制率為指標(biāo),篩選
5、出ACE抑制活性較高的2個級份p2-2-2和p2-2-4,它們的ACE抑制率分別為34.1%和41.6%;為了確定p2-2-2和p2-2-4的結(jié)構(gòu),采用ESI-MS/MS二級質(zhì)譜對其氨基酸序列進(jìn)行測定,結(jié)果表明:p2-2-2氨基酸序列Lys-Val-Glu-Pro-Leu-Pro,IC50是22.9μM,p2-2-4氨基酸序列為Pro-Ala-Leu,IC50是12.2μM。
(3)為了進(jìn)一步探索Lys-Val-Glu-Pro
6、-Leu-Pro和Pro-Ala-Leu進(jìn)入體內(nèi)的穩(wěn)定性,將這2種ACE抑制肽模擬體內(nèi)消化系統(tǒng)環(huán)境進(jìn)行水解,結(jié)果表明:Lys-Val-Glu-Pro-Leu-Pro和Pro-Ala-Leu經(jīng)不同pH處理后以及胃腸消化酶水解后其ACE抑制活性沒有顯著變化(P>0.05)。探討了Lys-Val-Glu-Pro-Leu-Pro和Pro-Ala-Leu對ACE的抑制類型及其機制,根據(jù)它們催化合成底物HHL生成馬尿酸的抑制動力學(xué)和Linweave
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