發(fā)酵羊乳產(chǎn)ACE抑制肽乳桿菌的篩選及產(chǎn)肽條件優(yōu)化.pdf

1、當(dāng)今社會(huì)，高血壓已成為一種常見(jiàn)的慢性病，嚴(yán)重危害著人們的健康。研究發(fā)現(xiàn)，一些乳桿菌在其發(fā)酵過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生一類具有降血壓功能的多肽——ACE抑制肽，這些多肽安全無(wú)毒，并且能夠起到較好的降低血壓的效果。國(guó)外已有相關(guān)降血壓乳制品問(wèn)世，而國(guó)內(nèi)尚停留在ACE抑制肽的研究階段，并且使用的發(fā)酵菌和原料也較為單一。陜西是羊乳大省，但羊乳產(chǎn)品卻以附加值較低的羊奶粉為主，本研究使用陜西的優(yōu)勢(shì)資源羊乳作為原料乳，對(duì)于我國(guó)羊乳資源的開發(fā)利用，提高其附加值具有促進(jìn)

2、作用。
　　 本研究以ACE抑制率為指標(biāo)，首先從28株益生乳桿菌中篩選得到了4株具有較強(qiáng)產(chǎn)肽能力的菌株，并通過(guò)16SrDNA測(cè)序法對(duì)它們進(jìn)行了菌種鑒定;接著通過(guò)胃腸道模擬試驗(yàn)對(duì)這4株益生乳桿菌進(jìn)行復(fù)篩，得到了產(chǎn)ACE抑制肽能力較強(qiáng)且耐受胃腸道消化的1株益生乳桿菌——保加利亞乳桿菌LB6;之后，以其為試驗(yàn)菌株，利用單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面設(shè)計(jì)分別對(duì)LB6發(fā)酵羊乳生產(chǎn)ACE抑制肽的產(chǎn)肽條件和發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化，確定了LB6的較適產(chǎn)肽條件

3、和較優(yōu)培養(yǎng)基成分。得到了以下結(jié)論:
　　 本課題所研究的28株益生乳桿菌中，有19株乳桿菌的發(fā)酵羊乳具有ACE抑制活性，抑制率最低的為2.27％，最高的為85.52％。其中使用羅伊氏乳桿菌LT33、保加利亞乳桿菌LB6、鼠李糖乳桿菌LR22和乳桿菌L69發(fā)酵的羊乳中ACE抑制率較高。
　　 通過(guò)16SrDNA菌種鑒定，LB6、LR22、LT33和L69均屬乳桿菌屬，其中LB6為德氏乳桿菌保加利亞亞種，LR22為鼠李糖乳桿

4、菌，LT33為羅伊氏乳桿菌，乳桿菌L69為植物乳桿菌。
　　 在經(jīng)歷人工胃腸液的消化后，LB6和LT33的發(fā)酵羊乳ACE抑制率明顯高于其他兩株乳桿菌，而LB6發(fā)酵羊乳不論在人工胃液還是人工腸液中，其ACE抑制率均表現(xiàn)出更加穩(wěn)定的特點(diǎn)。并且其發(fā)酵所需時(shí)間較短、凝乳效果較好。
　　 試驗(yàn)表明，一些在牛乳發(fā)酵過(guò)程中能夠促進(jìn)ACE抑制肽產(chǎn)生的發(fā)酵條件，在保加利亞乳桿菌發(fā)酵羊乳的過(guò)程中同樣可以促進(jìn)ACE抑制肽的產(chǎn)生。Placket

5、t-Burman試驗(yàn)篩選結(jié)果表明，在眾多因子中發(fā)酵溫度、乳清粉濃度和乳酸鈣濃度對(duì)于發(fā)酵羊乳的ACE抑制率影響較大。采用Box-Behnken試驗(yàn)得到優(yōu)化后的發(fā)酵條件為:復(fù)原羊乳濃度11％，巴氏殺菌時(shí)間15min，發(fā)酵溫度為35℃，培養(yǎng)時(shí)間12h，乳清粉濃度為0.8％，乳酸鈣濃度為0.5％，接種量5％。驗(yàn)證結(jié)果與試驗(yàn)結(jié)果無(wú)顯著性差異，ACE抑制率達(dá)到85.88±0.6％，高出對(duì)照組10.64％。
　　 通過(guò)單因素試驗(yàn)研究了在羊乳中

6、添加不同物質(zhì)對(duì)于保加利亞乳桿菌LB6生產(chǎn)ACE抑制肽的影響，經(jīng)Plackett-Burman試驗(yàn)篩選得到了對(duì)于發(fā)酵羊乳中ACE抑制率影響較大的三個(gè)因子:大豆蛋白胨、葡萄糖和酪蛋白。經(jīng)爬坡和Box-Behnken試驗(yàn)對(duì)LB6產(chǎn)ACE抑制肽培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化，其成分為:復(fù)原羊乳11％，大豆蛋白胨0.30％、葡萄糖1.15％、酪蛋白0.15％。驗(yàn)證結(jié)果與試驗(yàn)結(jié)果無(wú)顯著性差異，ACE抑制率高達(dá)92.31±0.5％，LB6活菌數(shù)達(dá)到1.04×108