2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩81頁未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、本研究旨在優(yōu)化枯草芽孢桿菌BE-91菌株木聚糖酶活力測定體系,提高酶活力測定方法的靈敏度和準(zhǔn)確性;建立一套高效、快速分離純化方法,獲得電泳純木聚糖酶樣品;獲得一套較全面的木聚糖酶酶學(xué)參數(shù),測定和分析蛋白質(zhì)氨基酸序列、二級結(jié)構(gòu)以及與其他種屬木聚糖酶的親緣關(guān)系;探索木聚糖酶的免疫原性,為枯草芽孢桿菌BE-91菌株木聚糖酶的工業(yè)化生產(chǎn)應(yīng)用提供理論依據(jù)。
   1.采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)對枯草芽孢桿菌BE-91菌株木聚糖酶活力測定條件

2、進(jìn)行系統(tǒng)研究,獲得優(yōu)化的木聚糖酶活力測定條件為:按1/9的比值添加稀釋100倍的木聚糖酶與預(yù)熱至62℃的濃度為0.8%的木聚糖底物(用pH值5.4~5.6、0.05 mol·L-1檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液配制),62℃水浴準(zhǔn)確反應(yīng)3min,加入2.0mL DNS溶液,沸水浴顯色10min,測定波長為540nm。在此優(yōu)化條件下,測得枯草芽孢桿菌BE-91菌株木聚糖酶活力達(dá)350.24U·mL-1。
   2.對枯草芽孢桿菌BE-9

3、1菌株進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng),通過超聲波破碎法證實(shí)木聚糖酶主要集中在胞外,測得發(fā)酵液酶活408U·mL-1。采用超濾和葡聚糖凝膠層析從發(fā)酵液中分離純化出電泳純木聚糖酶樣品,回收率高達(dá)69.17%,純化倍數(shù)18倍,比酶活達(dá)到28453.6U·mg-1。
   3.利用純化的BE-91木聚糖酶進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)研究,采用SDS-PAGE和凝膠層析測得分子量分別為22.54kD、22.31kD;IEF-PAGE測得等電點(diǎn)為9.63;以燕麥木聚糖為底物

4、時(shí),Km值和Vmax分別為0.5mg·mL-1、533U;穩(wěn)定溫度0-60℃;穩(wěn)定pH4.6~6.4;Fe2+、C02+有激活作用,Cu2+有強(qiáng)烈抑制作用。
   4.對枯草芽孢桿菌BE-91菌株木聚糖酶電泳純樣品進(jìn)行ESI-MS/MS測序,得到5個(gè)肽段信息:YNAPSIDGDR、TTFTQYWSVR、SDGGTYDIYTTTR、RPTGSNATITFSNHVNAWK、SPLIEYYVVDSWGTYRPTGTYK、經(jīng)NCBI-B

5、lastp和NCBI-Clustalx比對推測出木聚糖酶的氨基酸全序列,與劉正初在Genebank登錄的木聚糖酶基因(登錄號為EU233656)的氨基酸序列一致。通過生物信息學(xué)軟件DNAstar-Protean分析BE-91菌株木聚糖酶的二級結(jié)構(gòu),結(jié)果顯示該木聚糖酶屬分泌型、水溶性、跨膜蛋白;假定包括有2~4個(gè)α-螺旋,12~14個(gè)β-折疊,18個(gè)β-轉(zhuǎn)角,1個(gè)的疏水結(jié)構(gòu)域,8個(gè)親水結(jié)構(gòu)域,4~8個(gè)抗原決定簇;對全序列進(jìn)行GENOME比

6、對,建立系統(tǒng)演化關(guān)系,結(jié)果顯示與芽孢桿菌親緣關(guān)系較近,且比較保守。
   5.利用純化的BE-91菌株木聚糖酶免疫SPF小鼠,收集血清樣品,以建立的ELISA方法檢測血清樣品中IgG水平、INF-Υ和IL-4含量,利用SPSS軟件對結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果顯示,試驗(yàn)組IgG水平OD450nm=0.2159,與陰性組、空白組有極顯著性差異(P<0.01),空白組與陰性組無顯著性差異(P>0.05);試驗(yàn)組INF-Υ含量26.47pg·m

7、L-1,與陰性組、空白組和陽性組有極顯著性差異(P<0.Ol),陽性組與陰性組、空白組有極顯著性差異(P<0.01),空白組與陰性組無顯著性差異(P>0.05);試驗(yàn)組IL-4含量52.53pg·mL-l,與陽性組無顯著性差異(P>0.05),與陰性組、空白組有極顯著差異(P<0.01),空白組與陰性組無顯著性差異(P>0.05)。Western Blot驗(yàn)證出清晰的目的條帶,證明獲得的多克隆抗體是針對枯草芽孢桿菌BE-91菌株木聚糖酶

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論