高產(chǎn)纖維素酶菌株的選育及其在發(fā)酵豆渣生產(chǎn)飼料蛋白中的應(yīng)用.pdf

1、隨著經(jīng)濟的快速發(fā)展，人們的生活水平有了很大的改善和提高，對高蛋白類食物的需求很大，引起了蛋白飼料的短缺。在國內(nèi)，由于人們對豆渣的重視程度不夠，出現(xiàn)了豆渣資源的浪費，如果能將豆渣開發(fā)成為蛋白飼料，那么不僅能降低生產(chǎn)高蛋白飼料的成本，還能實現(xiàn)對豆渣資源的利用。
　　本論文主要工作包括:從堆積的枯樹葉下面采集土樣，并從中篩選具有分解纖維素能力的菌株。利用初篩和復(fù)篩的方法，篩選出一株產(chǎn)纖維素酶活力較高的菌株F6，并將其作為出發(fā)菌株進行復(fù)合

2、誘變選育，獲得一株高產(chǎn)纖維素酶的菌株SY901。通過菌株SY901、白地霉以及熱帶假絲酵母的混合培養(yǎng)對豆渣進行固態(tài)發(fā)酵，以降低豆渣中的纖維含量、提高發(fā)酵產(chǎn)物中的蛋白含量。經(jīng)過大量的實驗工作，得到了如下結(jié)果:
　　(1)確定了CMC酶活力測定的最佳條件。通過單因素實驗研究了酶促反應(yīng)時間、初始pH值、酶促反應(yīng)溫度、底物濃度、波長、底物和粗酶液添加量六個影響CMC酶活力測定的因素。根據(jù)單因素實驗結(jié)果，進行了正交實驗，最終確定CMC酶活力

3、測定的最佳條件為:初始pH值為6.2，底物和粗酶液的添加量各為2mL，酶促反應(yīng)溫度為40℃，酶促反應(yīng)時間為30min，波長為520nm，底物濃度為10g/L。
　　(2)篩選具有分解纖維素能力的菌株。通過剛果紅-微晶纖維素培養(yǎng)基對土樣進行初篩，共篩選出12株在纖維素平板上生長良好的菌株;通過測定濾紙酶活力和CMC酶活力，對初篩的12株菌作進一步復(fù)篩，獲得一株產(chǎn)酶活力較高的菌株F6，其CMC酶活力為905.355U/mL，濾紙酶活力

4、為233.317U/mL。
　　(3)高產(chǎn)纖維素酶菌株的復(fù)合誘變選育。以菌株F6作為原始菌株，對其進行紫外線和EMS的復(fù)合誘變選育，獲得了一株高產(chǎn)纖維素酶的菌株SY901，其CMC酶活力為3598.484U/mL，濾紙酶活力為2428.085U/mL。與原始菌株F6相比，菌株SY901產(chǎn)纖維素酶的能力有了很大的提高，其中CMC酶活力是菌株F6的4倍，濾紙酶活力是菌株F6的10倍。
　　(4)發(fā)酵豆渣菌種的確定。將菌株F6、菌

5、株SY901、粘紅酵母、白地霉、熱帶假絲酵母接種到以豆渣為唯一碳源的培養(yǎng)基上，觀察各個菌種的生長情況。將在豆渣培養(yǎng)基上生長良好的菌株SY901、白地霉、熱帶假絲酵母進行單菌種發(fā)酵，與空白對照相比，這三種菌的粗蛋白含量均增加了7.0％以上，因此，確定菌株SY901、白地霉和熱帶假絲酵母作為多菌種混合發(fā)酵的優(yōu)選菌種。將這三種菌按照一定順序組合后，進行多菌種發(fā)酵，結(jié)果表明，當(dāng)以菌株SY901、白地霉、熱帶假絲酵母這三種菌進行組合時，發(fā)酵后測得