熟肉制品中動物源性成分熒光定量PCR檢測方法的建立和應(yīng)用.pdf

1、隨著社會、經(jīng)濟的發(fā)展和人民生活水平的提高，肉類制品的需求量迅速增加，由于生產(chǎn)成本的差異，造成肉類產(chǎn)品的價格高低不一，為不法商販以低價肉冒充高價肉獲取不法利益創(chuàng)造了條件，肉制品摻假、造假事件頻繁發(fā)生。當消費者購買或食用了摻假或摻雜的肉類制品后，不僅會造成經(jīng)濟損失，還有可能對消費者身體健康造成損害，出現(xiàn)食物中毒、民族糾紛等事件，對社會穩(wěn)定產(chǎn)生一定的危害性。肉類制品的摻假摻雜主要是在一種價位較高的肉類中摻入一定數(shù)量的外觀類似的其它低價位肉類，

2、通過人為加入色素、香料等禁用的添加劑進行調(diào)味、調(diào)色處理后，冒充高價位肉類。摻假摻雜的肉制品較難分辨，特別是經(jīng)過熟制加工的肉制品更難進行分辨。早期的一些檢驗技術(shù)已經(jīng)無法滿足現(xiàn)代檢測需要，部分研究也只是針對未曾加工的生肉制品，在經(jīng)過高溫高壓的熟肉制品的摻假摻雜檢測上，原有的檢測方法分辨能力更差。因此迫切需要新的檢測技術(shù)和標準，為相關(guān)監(jiān)管部門提供評價和執(zhí)法的依據(jù)。
　　本研究引用國標及部分成熟方法中以線粒體DNA設(shè)計的探針及引物序列，以

3、線粒體DNA作為模板應(yīng)用于動物源性成分鑒別檢測。試驗過程中，采用成品的核酸提取試劑盒和PCR反應(yīng)體系試劑盒，在試劑盒提供的方法上，進一步對核酸提取和反應(yīng)體系進行優(yōu)化。核酸提取前，對樣品進行油脂的去除，液氮冷凍條件下研磨充分粉碎細胞及蛋白質(zhì)，再用進行核酸提取。與直接提取的DNA相比較，蒸煮制品經(jīng)過除去脂溶性雜質(zhì)前后DNA純度和總量相比均無顯著性差異，生肉制品經(jīng)過除去脂溶性雜質(zhì)前后DNA純度無顯著性差異，總量相比具有顯著性差異，煎炸制品和燒

4、烤制品經(jīng)過除去脂溶性雜質(zhì)前后相比均具有顯著性差異，進行油脂去除和液氮冷凍研磨的核酸提取物純度與含量更利于實驗。同時對探針、引物、模板用量和退火溫度進行優(yōu)化，確定多模板通用的反應(yīng)體系和反應(yīng)參數(shù)，實驗表明使用的引物和探針具有很好的檢測特異性，對DNA水平和不同熟制方式的混合肉樣靈敏度分析，得出豬、雞 DNA混樣的檢測下限定為0.1％，鴨DNA混樣的檢測下限為0.5%，混合肉樣蒸煮條件下豬肉體系檢測下限定為0.1%，雞肉體系檢測下限定為0.5

5、%，鴨肉體系檢測下限定為0.5%；混合肉樣煎炸條件下豬肉體系檢測下限定為0.5%，雞肉體系檢測下限定為0.5%，鴨肉體系檢測下限定為0.5%；混合肉樣燒烤條件下豬肉體系檢測下限定為0.5%，雞肉體系檢測下限定為0.5%，鴨肉體系檢測下限定為0.5%。按照以上確定的檢測體系，本研究建立的各檢測體系對實際肉樣在混合檢測極限時準確率達到100.0%?？梢灶A(yù)計在實際的檢測工作中，采用實時熒光 PCR方法快速檢測熟肉制品中的動物源性成分切實可行，