重組畢赤酵母產(chǎn)PGA高密度發(fā)酵及其固定化.pdf

1、青霉素G?；甘怯糜诳股刂虚g體6-氨基頭孢烷酸(6-APA)和7-氨基脫乙酰頭孢烷酸(7-ADCA)生產(chǎn)的重要酶制劑。青霉素G?；改苡谒嵝原h(huán)境下催化D-氨基酸類(lèi)似物與β-內(nèi)酰胺母核縮合反應(yīng)，生成新的β-內(nèi)酰胺抗生素。該酶的大量生產(chǎn)和使用在青霉素和頭孢菌類(lèi)抗生素的廣泛使用和低廉價(jià)格方面具有重要意義。酶法合成的優(yōu)點(diǎn)包括反應(yīng)絕對(duì)專(zhuān)一性、避免環(huán)境污染、反應(yīng)條件溫和、生產(chǎn)成本降低等。因此利用微生物發(fā)酵產(chǎn)青霉素G酰化酶，對(duì)獲得完整發(fā)酵工藝有著積

2、極的現(xiàn)實(shí)意義。主要研究結(jié)果如下:
　　 發(fā)酵條件優(yōu)化:通過(guò)單因素試驗(yàn)確定得到重組畢赤酵母產(chǎn)青霉素G?；缸钸m條件:甘油濃度40g/L、氨水濃度0.1％、甲醇濃度1.0％、pH5.5、接種量10％。運(yùn)用Box-BehnkenDesign考察重組畢赤酵母產(chǎn)青霉素G?；傅陌l(fā)酵條件優(yōu)化，響應(yīng)面分析確定得到二次多項(xiàng)回歸方程擬合程度良好，該模型R2=0.9813，優(yōu)化過(guò)后酶活可達(dá)到8680±12U/L。
　　 發(fā)酵動(dòng)力學(xué)模型建立:

3、利用5L發(fā)酵罐對(duì)重組畢赤酵母產(chǎn)青霉素G?；傅陌l(fā)酵過(guò)程進(jìn)行放大，發(fā)酵液青霉素G?；富盍蛇_(dá)到46345U/L。根據(jù)該菌株于5L發(fā)酵罐中不同階段的生長(zhǎng)和產(chǎn)物形成動(dòng)力學(xué)和發(fā)酵實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析的基礎(chǔ)上，應(yīng)用Matlab工具軟件進(jìn)行曲線擬合，建立了較為合理的重組畢赤酵母分批補(bǔ)料發(fā)酵生產(chǎn)青霉素G酰化酶的菌體生長(zhǎng)、青霉素G?；负铣梢约盎|(zhì)消耗動(dòng)力學(xué)模型。所建模型能夠較好描述菌株發(fā)酵產(chǎn)青霉素G?；傅膭?dòng)態(tài)過(guò)程，能夠?yàn)楹罄m(xù)的進(jìn)一步放大試驗(yàn)提供參考。

4、
　　 酶的分離純化:依次采用超濾濃縮，硫酸銨純化，酶液超濾脫鹽等方法對(duì)來(lái)源于重組畢赤酵母產(chǎn)青霉素G?；高M(jìn)行純化，得到純度較高的青霉素G?；浮Ｇ嗝顾谿?；复置敢航?jīng)過(guò)，比活力達(dá)到31.3U/mg，純度提高6.38倍，回收率為49.78％。
　　 青霉素G?；傅墓潭ɑ?通過(guò)參閱文獻(xiàn)和實(shí)驗(yàn)比較，篩選青霉素G酰化酶的固定化載體。探討了LX-1000EP-2樹(shù)脂固定化青霉素G酰化酶的工藝條件。試驗(yàn)采用單因素試驗(yàn)和Box-B