功能性核酸8-17 DNAzyme的活性調(diào)控.pdf

1、功能性核酸是指除了作為遺傳信息的載體等傳統(tǒng)生物功能之外，具有催化活性、基因表達的調(diào)控、以及特異的結(jié)合能力等功能的核酸類分子。無論是生物體內(nèi)天然存在的還是人工合成的，功能性核酸最近受到了越來越多的重視。特別是大量非表達小RNA和調(diào)控RNA的發(fā)現(xiàn)使人們對核酸的認識發(fā)生了根本性的改變。而對于功能性核酸的活性控制研究較少，如果實現(xiàn)人為控制，將對我們了解功能核酸的作用機制以及通過控制核酸類藥物的活性達到期待的療效等有積極意義。
　　 脫氧

2、核酶(DNAzyme)是近年來研究發(fā)現(xiàn)的有代表性的一類功能性核酸。具有剪切RNA分子或DNA分子、T4聚核苷酸激酶樣活性、DNA連接酶樣活性以及催化卟啉金屬離子化等多種生物催化功能。本文以8-17 DNAzyme為例，探討了通過控制DNAzyme的拓撲結(jié)構(gòu)調(diào)控其RNA剪切活性，旨在建立一個控制DNAzyme活性的模型，開拓通過引起拓撲結(jié)構(gòu)的變化來調(diào)控功能性核酸活性的新思路。
　　 研究發(fā)現(xiàn)，用T4 DNA連接酶將8-17 DNA

3、zyme連接成環(huán)后，其特異性催化RNA磷酸二酯鍵水解的活性大大降低。而通過將8-17 DNAzyme設(shè)計成一個大的發(fā)卡結(jié)構(gòu)，拉近8-17 DNAzyme兩端也同樣使其活性降低。通過限制性內(nèi)切酶EcoR I切斷發(fā)卡結(jié)構(gòu)的雙鏈Stem部位，使拉近的8-17 DNAzyme兩端遠離后，RNA剪切活性得到了恢復(fù)，實現(xiàn)了用一種酶的活性對另外一種功能性分子活性的控制。
　　 本研究達到了通過控制功能性核酸8-17 DNAzyme的拓撲結(jié)構(gòu)變