解螺旋酶Ⅱ（UvrD）的克隆表達(dá)活性鑒定及其功能性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、大腸桿菌解螺旋酶Ⅱ(UvrD)是一種在甲基定向錯配修復(fù)(methvl-directed mismatch repair,MMR)和核苷酸切除修復(fù)(nucleotide excision repair)中起作用的3’→5’SF1解旋酶。它可以通過結(jié)合和水解ATP，將雙鏈DNA解鏈。本研究從大腸桿菌K12基因組中擴(kuò)增出uvrD基因，將其克隆到pET-28a中，構(gòu)建出原核表達(dá)載體pET-28a-uvrD，并在大腸桿菌中大量誘導(dǎo)，為可溶性的表達(dá)

2、。利用鎳親和柱純化和透析后，經(jīng)SDS-PAGE分析表明UvrD的純度為90％以上。通過ATP酶活性檢測試劑盒測定每μg UvrD蛋白的ATP酶活性為0.087U。利用表面等離子共振(surface plasmon resonance，SPR)方法，測定和比較了UvrD與同源雙鏈分子(homoduplex)和異源雙鏈分子(heteroduplex)結(jié)合的動力學(xué)，以及鎂離子對此過程的影響。結(jié)果顯示，UvrD與DNA的平衡解離常數(shù)在10<'-

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