“加味二術(shù)顆粒劑”的制備工藝優(yōu)化及其藥效學(xué)研究.pdf

1、加味二術(shù)散是前期實驗根據(jù)斷奶仔豬的中獸醫(yī)群體病因辯證而自擬的中獸藥散劑。本研究以此為試驗依據(jù)，將加味二術(shù)散制成顆粒劑，并對其進(jìn)行藥效學(xué)研究。具體試驗方法及結(jié)果如下:
　　1.“加味二術(shù)顆粒劑”制備工藝篩選:對加味二術(shù)散提取進(jìn)行單因素考察，利用高效液相色譜法根據(jù)中華人民共和國獸藥典（第二部）要求對每味藥材進(jìn)行含量檢測，確定最佳單因素。建立正交試驗?zāi)Ｐ?，檢測每種方法中每味藥材的含量，確定最佳提取工藝。最后進(jìn)行輔料的篩選，根據(jù)高效液相色

2、譜法對每種輔料所制成的顆粒劑進(jìn)行含量檢測，確定輔料。
　　2.腹瀉模型的建立以及“加味二術(shù)顆粒劑”治療效果:根據(jù)參考文獻(xiàn)以及加味二術(shù)散的“抑木扶土，理氣活血”的用藥原則，選用番瀉葉建立“肝郁脾虛”的腹瀉模型。對小鼠灌以番瀉葉煎液，每天一次，連續(xù)5天，從第二天開始剖殺，觀察小鼠腸道內(nèi)容物形狀，根據(jù)小鼠腹瀉評分表對其腹瀉程度進(jìn)行評分，確定模型是否建立成功。腹瀉模型建立成功的基礎(chǔ)上，利用治療與預(yù)防兩種方法觀察加味二術(shù)顆粒劑的藥物作用效果

3、。治療組先灌以番瀉葉煎液兩天，再給予加味二術(shù)顆粒劑，于2h、4h、6h、8h四個時間點剖殺;預(yù)防組先灌以加味二術(shù)顆粒劑三天，再給予番瀉葉煎液，于2h、4h、6h、8h四個時間點剖殺。小鼠剖殺后觀察其腸道內(nèi)容物的形狀以及檢測粘膜乳糖酶的含量，確定加味二術(shù)顆粒劑的藥物作用效果。
　　3.加味二術(shù)顆粒劑藥效學(xué)研究:確定加味二術(shù)顆粒劑藥物作用效果后，對其進(jìn)行藥效學(xué)評價。設(shè)置三個劑量組，分別為高中低組;對小鼠灌以相應(yīng)劑量的加味二術(shù)顆粒劑三天

4、，再給予番瀉葉煎液，于2h、6h、8h后剖殺。通過觀察腸道內(nèi)容物的形狀，檢測粘膜乳糖酶、淀粉酶和胰蛋白酶的含量、對腸道組織切片的觀察確定小鼠的腹瀉程度。對小鼠血清中的白細(xì)胞介素1和腫瘤壞死因子α含量的測定以及對鈉氫交換泵mRNA的表達(dá)的測定觀察其治療機(jī)制。
　　結(jié)果:加味二術(shù)顆粒劑的最佳提取工藝為提取時間1h、提取次數(shù)2次、加醇量15倍、醇濃度50％、輔料篩選為乳糖，制作后的加味二術(shù)顆粒劑中，四味中藥的轉(zhuǎn)移率均能達(dá)到80％以上。腹

5、瀉模型的建立在第二天的時候小鼠的腹瀉率達(dá)到了100％，第四天開始出現(xiàn)自愈的現(xiàn)象，所以腹瀉模型建立成功且在第二天至第三天的時候腹瀉程度最嚴(yán)重。從腹瀉程度以及粘膜乳糖酶含量可以確定，預(yù)防組的治療效果明顯優(yōu)于治療組(P＜0.05)，所以采用預(yù)防的方法對加味二術(shù)顆粒劑進(jìn)行藥效學(xué)評價的研究。藥效學(xué)評價的試驗中，小鼠的粘膜乳糖酶的含量中藥物組均高于陰性對照組(P＜0.05);淀粉酶含量中藥物組均低于陰性對照組(P＜0.05)，且隨時間的變化降低，高

6、劑量組與陽性對照組數(shù)據(jù)無差異;胰蛋白酶含量中藥物組均低于陰性對照組(P＜0.05);中藥組IL-1β低于陰性對照組(P＜0.01)，中藥組TNF-α低于陰性對照組(P＜0.05);中藥組在3個時間段十二指腸絨毛高度高于陰性性對照組(P＜0.05)，中藥組隱窩深度低于陰性對照組（P＜0.05），中藥組V/C高于陰性對照組（P＜0.05）;NHE2的表達(dá)中，中藥組均高于陰性對照組與陽性對照組(P＜0.05); NHE3的表達(dá)中中藥組均高于陰

7、性對照組與陽性對照組(P＜0.05); NHE8的表達(dá)中高劑量組高于陰性對照組與陽性對照組(P＜0.05)，中劑量組與低劑量組高于陰性對照組(P＜0.05)，與陽性對照組差異不顯著。
　　結(jié)論:加味二術(shù)顆粒劑對小鼠腹瀉有明顯的治療作用;加味二術(shù)顆粒劑降低促炎因子的含量，“加味二術(shù)顆粒劑”中藥組NHE2的表達(dá)高于陰性對照組（P＜0.05），“加味二術(shù)顆粒劑”中藥組NHE3的表達(dá)與陰性對照組差異不顯著，“加味二術(shù)顆粒劑”中藥組的高劑量