荷斯坦牛乳蛋白毛細(xì)管電泳指紋圖譜的建立及應(yīng)用.pdf

1、近些年來(lái)，我國(guó)原料乳摻假的行為屢見(jiàn)不鮮，一些不法生產(chǎn)商為提高蛋白含量從而獲得高額利潤(rùn)，在原料乳中摻入廉價(jià)的非乳蛋白以及非蛋白氮來(lái)冒充或替代乳蛋白，欺詐消費(fèi)者，甚至危害身體健康。為了杜絕此類現(xiàn)象，目前，迫切需要一種快速的檢測(cè)方法來(lái)檢測(cè)牛乳中蛋白成分，檢測(cè)各種原料乳的摻假情況。本課題旨在用毛細(xì)管電泳法研究原料乳蛋白成分，建立乳蛋白指紋圖譜，檢測(cè)原料乳摻假情況。
　　 本課題主要從以下四個(gè)方面開(kāi)展研究。第一，應(yīng)用未涂層毛細(xì)管區(qū)帶電泳和

2、涂層毛細(xì)管區(qū)帶電泳的兩種方法檢測(cè)乳中蛋白質(zhì)，選擇其中一種較為合適的檢測(cè)方法作為分離測(cè)定牛乳蛋白的方法。并對(duì)選擇的方法進(jìn)行電泳條件的優(yōu)化。用優(yōu)化的電泳方法測(cè)定五種牛乳蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)原料乳進(jìn)行準(zhǔn)確的定性和定量分析。第二，應(yīng)用選定的方法建立荷斯坦立牛乳蛋白指紋圖譜，從相似度、含量相似度和指紋圖譜指數(shù)等方面評(píng)價(jià)指紋圖譜的優(yōu)劣。第三，應(yīng)用建立的毛細(xì)管電泳指紋圖譜檢測(cè)原料乳中摻加非蛋白氮情況。第四，應(yīng)用選擇優(yōu)化的毛細(xì)管電泳方法檢測(cè)混合乳的乳蛋白分布

3、情況，定性定量的檢測(cè)混合乳的摻假情況。
　　 研究結(jié)果如下：
　　 1.本實(shí)驗(yàn)充分證明了毛細(xì)管區(qū)帶電泳的兩種實(shí)驗(yàn)方法中，分別從分離效果、定性定量特征、分離條件和方法學(xué)考察等多方面比較結(jié)果可知，涂層毛細(xì)管要優(yōu)于未涂層毛細(xì)管方法。并對(duì)涂層毛細(xì)管方法的電泳條件進(jìn)行優(yōu)化。
　　 2.應(yīng)用優(yōu)化后的涂層毛細(xì)管區(qū)帶電泳方法分析了10個(gè)產(chǎn)地的荷斯坦牛原料乳的乳蛋白，確定10個(gè)乳蛋白特征峰，可用于定性鑒定。重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和回收率結(jié)

4、果較好，滿足定量檢測(cè)的要求。對(duì)不同批次的荷斯坦牛乳樣品的指紋圖譜進(jìn)行比較，指紋圖譜的相似度、含量相似度，結(jié)果良好，另外用色譜指紋圖譜指數(shù)F和相對(duì)指數(shù)Fr來(lái)評(píng)價(jià)指紋圖譜的優(yōu)劣，從而建立了原料乳蛋白的毛細(xì)管電泳指紋圖譜。
　　 3.利用建立的原料乳蛋白的指紋圖譜來(lái)檢測(cè)牛乳中添加非蛋白氮的情況，根據(jù)模擬添加非蛋白氮實(shí)驗(yàn)，來(lái)定性判斷原料乳摻假情況。
　　 4.應(yīng)用優(yōu)化的涂層毛細(xì)管區(qū)帶電泳方法檢測(cè)牛乳摻加山羊乳的混合乳摻假情況。通

5、過(guò)對(duì)比不同物種乳的毛細(xì)管區(qū)帶電泳圖，依據(jù)各個(gè)酪蛋白遷移時(shí)間的差異找出能夠明顯區(qū)分兩種乳的特性酪蛋白，并通過(guò)特性酪蛋白的峰面積比值與添加量的線性關(guān)系來(lái)定量分析乳的摻假情況。
　　 本課題利用高效毛細(xì)管電泳分析了乳蛋白成分，電泳優(yōu)化后的條件是：聚丙烯酰胺涂層毛細(xì)管柱，分離電壓25KV，pH=3.0，柱溫25℃，214nm檢測(cè)波長(zhǎng)；該方法測(cè)得牛乳中五種標(biāo)準(zhǔn)蛋白在不同線性范圍內(nèi)的線性相關(guān)系數(shù)均為0.9986以上；并建立了毛細(xì)管電泳指紋圖