荷斯坦牛乳蛋白毛細管電泳指紋圖譜的建立及應用.pdf

1、近些年來，我國原料乳摻假的行為屢見不鮮，一些不法生產(chǎn)商為提高蛋白含量從而獲得高額利潤，在原料乳中摻入廉價的非乳蛋白以及非蛋白氮來冒充或替代乳蛋白，欺詐消費者，甚至危害身體健康。為了杜絕此類現(xiàn)象，目前，迫切需要一種快速的檢測方法來檢測牛乳中蛋白成分，檢測各種原料乳的摻假情況。本課題旨在用毛細管電泳法研究原料乳蛋白成分，建立乳蛋白指紋圖譜，檢測原料乳摻假情況。
　　 本課題主要從以下四個方面開展研究。第一，應用未涂層毛細管區(qū)帶電泳和

2、涂層毛細管區(qū)帶電泳的兩種方法檢測乳中蛋白質(zhì)，選擇其中一種較為合適的檢測方法作為分離測定牛乳蛋白的方法。并對選擇的方法進行電泳條件的優(yōu)化。用優(yōu)化的電泳方法測定五種牛乳蛋白標準品，對原料乳進行準確的定性和定量分析。第二，應用選定的方法建立荷斯坦立牛乳蛋白指紋圖譜，從相似度、含量相似度和指紋圖譜指數(shù)等方面評價指紋圖譜的優(yōu)劣。第三，應用建立的毛細管電泳指紋圖譜檢測原料乳中摻加非蛋白氮情況。第四，應用選擇優(yōu)化的毛細管電泳方法檢測混合乳的乳蛋白分布

3、情況，定性定量的檢測混合乳的摻假情況。
　　 研究結(jié)果如下：
　　 1.本實驗充分證明了毛細管區(qū)帶電泳的兩種實驗方法中，分別從分離效果、定性定量特征、分離條件和方法學考察等多方面比較結(jié)果可知，涂層毛細管要優(yōu)于未涂層毛細管方法。并對涂層毛細管方法的電泳條件進行優(yōu)化。
　　 2.應用優(yōu)化后的涂層毛細管區(qū)帶電泳方法分析了10個產(chǎn)地的荷斯坦牛原料乳的乳蛋白，確定10個乳蛋白特征峰，可用于定性鑒定。重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和回收率結(jié)

4、果較好，滿足定量檢測的要求。對不同批次的荷斯坦牛乳樣品的指紋圖譜進行比較，指紋圖譜的相似度、含量相似度，結(jié)果良好，另外用色譜指紋圖譜指數(shù)F和相對指數(shù)Fr來評價指紋圖譜的優(yōu)劣，從而建立了原料乳蛋白的毛細管電泳指紋圖譜。
　　 3.利用建立的原料乳蛋白的指紋圖譜來檢測牛乳中添加非蛋白氮的情況，根據(jù)模擬添加非蛋白氮實驗，來定性判斷原料乳摻假情況。
　　 4.應用優(yōu)化的涂層毛細管區(qū)帶電泳方法檢測牛乳摻加山羊乳的混合乳摻假情況。通

5、過對比不同物種乳的毛細管區(qū)帶電泳圖，依據(jù)各個酪蛋白遷移時間的差異找出能夠明顯區(qū)分兩種乳的特性酪蛋白，并通過特性酪蛋白的峰面積比值與添加量的線性關(guān)系來定量分析乳的摻假情況。
　　 本課題利用高效毛細管電泳分析了乳蛋白成分，電泳優(yōu)化后的條件是：聚丙烯酰胺涂層毛細管柱，分離電壓25KV，pH=3.0，柱溫25℃，214nm檢測波長；該方法測得牛乳中五種標準蛋白在不同線性范圍內(nèi)的線性相關(guān)系數(shù)均為0.9986以上；并建立了毛細管電泳指紋圖