具有共生作用乳酸菌與酵母菌培養(yǎng)基優(yōu)化及促生物質(zhì)的分離.pdf

1、以?xún)?nèi)蒙古錫盟地區(qū)酸馬奶中分離出來(lái)的能夠通過(guò)交互添加代謝產(chǎn)物而相互促進(jìn)生長(zhǎng)的一株乳酸菌LC5和一株酵母菌YE4為研究菌株，進(jìn)行菌種培養(yǎng)基優(yōu)化及酵母菌YE4代謝產(chǎn)物中能夠促進(jìn)乳酸菌LC5生長(zhǎng)的促生物質(zhì)產(chǎn)生動(dòng)力學(xué)研究，并且對(duì)促生物質(zhì)進(jìn)行初步分離。
　　通過(guò)對(duì)乳酸菌和酵母菌各自五種常用的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，選出適合酵母菌YE4生長(zhǎng)的YPD培養(yǎng)基和乳酸菌LC5生長(zhǎng)的M17培養(yǎng)基作為各自的基礎(chǔ)培養(yǎng)基?；A(chǔ)培養(yǎng)基成分的優(yōu)化采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，

2、獲得YPD和M17的改良配方，對(duì)優(yōu)化前后培養(yǎng)基對(duì)比發(fā)現(xiàn)：改良YPD培養(yǎng)基中酵母菌YE4的OD值為1.952，是基礎(chǔ)培養(yǎng)基的1.06倍；活菌數(shù)比基礎(chǔ)培養(yǎng)基 YPD高一個(gè)數(shù)量級(jí)，可達(dá)到5.01×108cfu/ml，且二者之間差異顯著（P<0.05）。因此，YPD培養(yǎng)基的改良效果是明顯的。同樣，改良M17培養(yǎng)基中乳酸菌LC5的OD值可達(dá)到1.537，是基礎(chǔ)培養(yǎng)基的1.22倍；活菌數(shù)為9.2×108cfu/ml是基礎(chǔ)培養(yǎng)基M17的5.97倍；且

3、M17較改良M17培養(yǎng)基的pH值低。因此，M17培養(yǎng)基的改良效果也是顯著的（P<0.05）。
　　對(duì)酵母菌YE4代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的動(dòng)力學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，酵母菌YE4在60h時(shí)所產(chǎn)的代謝物對(duì)乳酸菌LC5的促進(jìn)作用最好，因此，酵母菌YE4代謝產(chǎn)物的制備條件為30℃振蕩培養(yǎng)60±2h。且代謝產(chǎn)物的添加量為40%時(shí)對(duì)乳酸菌LC5的促進(jìn)作用效果最好。
　　通過(guò)對(duì)酵母菌 YE4代謝產(chǎn)物的超濾發(fā)現(xiàn)代謝產(chǎn)物中分子量為10KD

4、菌 LC5的促進(jìn)作用最佳，因此，把該分子量的物質(zhì)稱(chēng)為酵母菌 YE4對(duì)乳酸菌 LC5生長(zhǎng)的促生物質(zhì)。促生物質(zhì)在波長(zhǎng)為190-700nm的紫外分光光度計(jì)掃描發(fā)現(xiàn)，其在243nm和301nm時(shí)出現(xiàn)兩個(gè)吸收峰，故將該物質(zhì)初步的認(rèn)為是蛋白或肽類(lèi)物質(zhì)的混合物。經(jīng)過(guò)80%硫酸銨沉淀促生物質(zhì)，再依次經(jīng)Sephadex G-75和Sephadex G-50凝膠柱層析，分離得到對(duì)乳酸菌LC5有促進(jìn)作用的物質(zhì)。該物質(zhì)電泳后呈現(xiàn)六條條帶，其中一條分子量小于14