鯉魚腸黏膜益生乳酸菌的篩選及培養(yǎng)基的優(yōu)化.pdf

1、在水產(chǎn)動(dòng)物疾病的防控中，由于抗生素等藥物的大量使用，導(dǎo)致了細(xì)菌多重抗藥性、藥物殘留和危害環(huán)境等問題的出現(xiàn)，使得人類致力尋求對(duì)自身和環(huán)境無毒、無害的藥物和產(chǎn)品，以期能夠部分或全部替代抗生素的使用。而益生菌的出現(xiàn)和使用，則相應(yīng)的緩解了以上問題。本研究就是基于以上理念，在國(guó)內(nèi)首次從鯉魚腸黏膜分離篩選出具有抗逆性、對(duì)病原菌具有拮抗性、相對(duì)安全的益生乳酸菌。為其在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的應(yīng)用打下了良好的基礎(chǔ)。 本研究主要分以下兩部分試驗(yàn)進(jìn)行：

2、 試驗(yàn)一主要做的是益生乳酸菌株的篩選。首先通過酸化膽鹽培養(yǎng)基，從鯉魚腸黏膜固有菌群中共分離到8株乳酸菌。然后通過耐受膽鹽、耐受pH值性、耐受蛋白酶和耐高溫等試驗(yàn)，篩選出2株抗逆性較強(qiáng)的菌株，其中在膽鹽耐受性試驗(yàn)中，YL-1和YL-7在膽鹽濃度0.4％、培養(yǎng)4h時(shí)仍有30％以上的存活率；在pH值耐受性試驗(yàn)時(shí)，2株乳酸菌均可在酸性和堿性條件下存活；胰蛋白酶對(duì)2株菌的存活率沒有影響；在70℃的高溫中，2株乳酸菌均有一定的耐受性。在體外抑菌試驗(yàn)

3、中，通過共培養(yǎng)和上清液抑菌試驗(yàn)的結(jié)果發(fā)現(xiàn)：YL-1對(duì)嗜水氣單胞菌的抑菌效果優(yōu)于YL-7，因此選用YL-1做為益生菌的候選菌株。通過對(duì)YL-1上清液抑菌物質(zhì)分析可以發(fā)現(xiàn)，其抑菌物質(zhì)主要是有機(jī)酸和對(duì)胰蛋白酶敏感的一類物質(zhì)。在YL-1的藥物敏感性試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，該菌株存在著一定的耐藥性。對(duì)小白鼠和鯉魚的接種，初步認(rèn)定菌株YL-1 具有安全性。最后，通過一系列的生理生化試驗(yàn)，初步鑒定YL-1是糞腸球菌。 試驗(yàn)二為 YL-1增菌培養(yǎng)基的優(yōu)化。

4、在前半部試驗(yàn)中，主要是通過對(duì)最佳碳源的篩選、最佳氮源的篩選、最佳無機(jī)鹽離子的篩選以及最佳刺激因子的篩選等單因子試驗(yàn)，篩選出對(duì) YL-1 生長(zhǎng)有利的各個(gè)因子。之后在SAS軟件的輔助下，通過Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)在培養(yǎng)基的各個(gè)因子中篩選出對(duì) YL-1 生長(zhǎng)有利的重要因子，再進(jìn)行最陡爬坡試驗(yàn)逼近最大響應(yīng)區(qū)域，最后在Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)下確定最大響應(yīng)值，并通過優(yōu)化的結(jié)果驗(yàn)證，表明預(yù)測(cè)值和實(shí)際值有良好的擬合性，優(yōu)化模型可