蝦類蛋白質的雙向電泳研究.pdf

1、以數量增長為主的規(guī)?；B(yǎng)殖使蝦肉的食用品質大幅下降，尋找一種有效的蝦肉品質評價及等級標注方法、以及對蝦肉品質形成機理和養(yǎng)殖品質控制研究已成為國內外研究的熱點。迄今為止，對生鮮蝦肉品質評價研究主要集中于營養(yǎng)成分分析、風味物質檢測、過敏原檢測等方面，而對優(yōu)質蝦肉生鮮品質的形成機理、控制和評價尚缺乏有效的方法。雙向凝膠電泳技術具有高通量、高分辨率的特點，為生鮮蝦肉品質及形成機理研究提供了新的思路。借助雙向電泳技術對不同品種蝦肉進行差異分析，尋

2、找與其食用品質相關的標記蛋白，對蝦類養(yǎng)殖以及蝦肉品質的控制、評價及等級標注等具有重要意義。
　　 本研究通過對蝦肉蛋白樣品制備和雙向電泳條件等相關技術參數進行比較和優(yōu)化，建立了蝦肉蛋白質的雙向電泳方法，并以目前國內普遍養(yǎng)殖的南美白對蝦、刀額新對蝦、羅氏沼蝦和青蝦為研究對象，建立四種不同品種生鮮蝦肉2-DE圖譜，并進行差異分析。主要實驗結果如下：
　　 1、通過對蝦肉取樣部位、樣品裂解液的組成的比較研究和優(yōu)化，發(fā)現從蝦肉第

3、三腹節(jié)內部取樣，用液氮進行研磨后，加入8M尿素，4％CHAPS,40mMTris,0.5％CarrierAmpholyte,1％TBP裂解液能有效提高蛋白的抽提率，蛋白抽提率達(166.68±2.36)μg/mg;Clean up試劑盒能進一步純化蛋白，去除雜質，使2-DE圖譜背景更加清晰，具有較高的分辨率和良好的重復性。
　　 2、通過對水化方式、等電聚焦參數、SDS-PAGE凝膠濃度、IPG膠條以及蛋白上樣量的比較研究和優(yōu)化

4、，建立了蝦肉蛋白雙向電泳的方法。結果表明，采用被動水化、同時延長水化時間，漸進式升壓的方式能獲得較好的等電聚焦效果；選擇pH4-7，24cm IPG膠條進行等電聚焦，蛋白上樣量是220μg，上樣體積是450μL，并用12％SDS-PAGE凝膠進行第二向蛋白質分離，可得到具有較高的分離度和分辨率的2-DE圖譜，重復樣品匹配率達75％以上，具有良好的重復性和穩(wěn)定性。
　　 3、取相同蛋白濃度的南美白對蝦、刀額新對蝦、羅氐沼蝦和青蝦的