霍亂弧菌蛋白質(zhì)組研究中雙向電泳技術(shù)平臺(tái)的建立.pdf

1、隨著人類基因組研究計(jì)劃的完成，生命科學(xué)的研究開始進(jìn)入后基因組時(shí)代。蛋白質(zhì)組學(xué)是在基因組學(xué)發(fā)展的基礎(chǔ)上形成的新興學(xué)科，主要是從整體水平研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的組成及其活動(dòng)規(guī)律，涉及對(duì)蛋白質(zhì)特性、蛋白質(zhì)翻譯后修飾以及蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間的相互作用研究的廣泛領(lǐng)域。目前，蛋白質(zhì)組學(xué)的研究已經(jīng)成為21世紀(jì)生命科學(xué)研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域之一。雙向凝膠電泳一次可以分離成千上萬個(gè)蛋白質(zhì)，是蛋白質(zhì)組學(xué)的主要分離技術(shù)。 本論文以霍亂弧菌N16961、JS32、D1

2、18、M045、93284等為實(shí)驗(yàn)菌株進(jìn)行雙向電泳平臺(tái)的建立。實(shí)驗(yàn)中采用超聲兼尿素、硫脲、CHAPS、DTT裂解法提取霍亂弧菌全菌蛋白，一向等電聚焦使用固相pH梯度凝膠條(pH4-7，6-11)，膠內(nèi)重泡脹技術(shù)，聚焦總電壓時(shí)56kVh-66kVh．用DTT和碘乙酰胺兩步平衡；二向電泳采用十二烷基磺酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠(12％，1.0mm)；對(duì)凝膠進(jìn)行考馬斯亮藍(lán)染色，用ImageScanner光密度掃描儀獲取染色后的2-DE凝膠圖譜。通過