印楝葉及其活性物質(zhì)的殺蝗活性研究.pdf

1、印楝(Azadirachta indica A. Juss)是印度傳統(tǒng)藥用植物，具有抗寄生蟲，抗氧化，抗癌，抗細菌，抗病毒，抗真菌，抗?jié)?，殺精，抗著床，抗糖尿病，調(diào)節(jié)免疫，殺軟體動物和殺蟲等生物活性。近年來關(guān)于印楝提取物殺蟲方面的研究較多，但對中華稻蝗(Oxya chinensis)的殺蟲活性研究較少。為開發(fā)新型植物殺蟲劑，本文研究了印楝葉及其活性物質(zhì)對中華稻蝗5齡幼蟲的殺蟲活性。在此基礎(chǔ)上，采取生物活性追蹤結(jié)合化學分離的方法對印楝葉

2、殺蝗活性物質(zhì)進行了分離及成分分析，同時研究了印楝葉提取物對中華稻蝗5齡幼蟲的主要作用方式及作用機理。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.印楝葉不同溶劑提取物的殺蝗活性研究：采用石油醚、95％乙醇和水3種不同極性溶劑對印楝葉進行提取，以中華稻蝗5齡幼蟲作為試蟲，采用浸蟲浸葉法測定印楝葉不同溶劑提取物的殺蟲活性。結(jié)果表明：3種不同溶劑提取物的得率分別為2.20％、25.95％和46.80％，對中華稻蝗5齡幼蟲具有較強殺蟲活性的是印楝葉石油

3、醚提取物，其次是95％乙醇提取物，水提取物未表現(xiàn)出明顯的殺蟲活性。石油醚提取物與95％乙醇提取物在25mg/mL濃度條件下，對試蟲的殺蟲活性差異不大，處理72h后試蟲的死亡率分別為33.33％和26.67％，但兩者的提取得率差異顯著，所以選擇95％乙醇提取物做進一步研究。
　　 2.印楝葉95％乙醇提取物殺蝗活性部位的篩選：采用液-液萃取法對印楝葉95％乙醇提取物進行初步分離，并采用浸蟲浸葉法對各萃取物進行殺蟲活性測定，選擇殺蟲

4、活性最強的萃取物做進一步研究。結(jié)果表明：印楝葉95％乙醇提取物的石油醚萃取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水部分的得率分別為13.88％、7.33％、4.22％、20.80％和48.34％。濃度為25mg/mL時，在該濃度條件下的所有測試時間段里，乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水部分均未表現(xiàn)出明顯的殺蟲活性。石油醚萃取物和氯仿萃取物表現(xiàn)出不同程度的殺蟲活性，處理24h后，試蟲的死亡率均為23.33％，處理48h后，試蟲的死

5、亡率分別為73.33％和30.00％，處理72h后，試蟲的死亡率分別為80.00％和43.33％。由此可見石油醚萃取物具有最高的殺蟲活性，因而對其進行毒力測定，結(jié)果顯示其48h和72h的半數(shù)致死濃度(Median lethalconcentration，LC50)分別為20.0667mg/mL和14.9262mg/mL。
　　 3.印楝葉95％乙醇提取物的石油醚萃取物中殺蝗活性物質(zhì)的柱層析分離：采用硅膠柱層析(洗脫劑為正己烷：乙

6、酸乙酯：丙酮(8.5：1：0.5))對印楝葉95％乙醇提取物的石油醚萃取物進行進一步的分離，分3段收集，采用浸蟲浸葉法測定柱層析各段物質(zhì)的殺蝗活性，并使用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(Gas chromatography-mass spectroscopy,GC-MS)對殺蝗活性最強的柱層析段進行成分分析。結(jié)果表明：柱層析第1段物質(zhì)具有最強的殺蝗活性，第Ⅱ段和第Ⅲ段物質(zhì)的殺蝗活性較弱，且這兩段物質(zhì)的殺蝗活性差異不顯著。以上三段物質(zhì)24h的LC

7、50分別為14.3563mg/mL、24.5616mg/mL和23.7878mg/mL。GC-MS對柱層析第1段物質(zhì)成分分析的結(jié)果顯示其主要由棕櫚酸乙酯、(Z，Z，Z)-9，12，15-十八碳三烯酸乙酯、二十五烷、二十六烷、二十七烷、二十九烷、三十烷、三十一烷、角鯊烯和芥酸酰胺組成。
　　 4.印楝葉95％乙醇提取物的石油醚萃取物殺蝗作用方式及作用機理研究：通過測定印楝葉95％乙醇提取物的石油醚萃取物對中華稻蝗5齡幼蟲的拒食、觸

8、殺、胃毒和生長發(fā)育抑制活性初步研究其殺蟲作用方式，并采用浸蟲浸葉法處理試蟲，于處理后24h、48h和72h取出試蟲中腸，制作石蠟切片，在光學顯微鏡和透射電鏡下觀察試蟲中腸的病理學變化來初步研究印楝葉95％乙醇提取物的石油醚萃取物的殺蟲作用機理。結(jié)果表明：印楝葉95％乙醇提取物的石油醚萃取物對中華稻蝗5齡幼蟲的主要作用方式為拒食。光鏡下，蝗蟲中腸細胞腫脹，變性，繼而局部脫落，嚴重者中腸細胞全部脫落，消融而僅剩下環(huán)肌層；電鏡下，蝗蟲中腸柱狀