殺松材線蟲(chóng)海洋細(xì)菌的分離、鑒定及其活性物質(zhì)的分析.pdf

1、松材線蟲(chóng)[Bursaphelenchus xylophilus(Steiner&Buhrer) Nickle]是危害松屬植物的重要病原物。尋找具有殺線活性的微生物并對(duì)其活性代謝產(chǎn)物進(jìn)行研究，是開(kāi)發(fā)效果好、毒性低和環(huán)境相容性好的微生物源殺線蟲(chóng)劑的一條重要途徑。為篩選對(duì)松材線蟲(chóng)具有較強(qiáng)殺線活性的海洋細(xì)菌，本文對(duì)采自于青島近海海域的樣品進(jìn)行細(xì)菌分離，得到49株細(xì)菌，以松材線蟲(chóng)為靶標(biāo)線蟲(chóng)，采用浸漬法對(duì)這些菌株的培養(yǎng)液進(jìn)行殺線蟲(chóng)活性測(cè)定，從中篩選

2、出5株具有較高殺線活性的海洋細(xì)菌，這5株細(xì)菌的培養(yǎng)上清液對(duì)松材線蟲(chóng)處理24 h后校正死亡率均高于80％。
　　結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察、生理生化特征測(cè)定以及16S rDNA序列分析結(jié)果，將5個(gè)菌株分別鑒定為海假交替單胞菌（Pseudoalteromonas marina）、產(chǎn)黑假交替單胞菌(P.nigrifaciens)、Vibrio atlanticus、蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)和印度芽孢桿菌（B.i

3、ndicus）。采用單因素法分析菌株H-42、S-16和G-23的最佳培養(yǎng)條件，結(jié)果表明，3個(gè)菌株產(chǎn)殺線活性物質(zhì)的最適起始pH分別為7.0、6.0和8.0，最適培養(yǎng)溫度分別為15℃、20℃和25℃;3個(gè)菌株的最適接種體菌齡、培養(yǎng)時(shí)間和培養(yǎng)基海水濃度分別為19 h、3d和100％。對(duì)菌株H-42和S-16的殺線活性物質(zhì)組分的研究表明，兩株細(xì)菌的培養(yǎng)上清液的揮發(fā)物粗提液具有很強(qiáng)的殺線活性，在24 h內(nèi)的殺線活性高達(dá)100％。經(jīng)SPME-GC

4、/MS(solid-phase microextraction-gaschromatography/mass)分析和鑒定，殺線活性揮發(fā)物成分主要為dimethyltrisulfide(LC90=0.060 mmol/L), benzaldehyde(LC90=0.309 mmol/L), dimethyl disulfide(LC90=0.162 mmol/L),tert-butylamine(LC90=0.366mmol/L)。對(duì)菌株