轉(zhuǎn)基因大豆在貯藏和加工過(guò)程中外源epsps成分變化規(guī)律的研究.pdf

1、epsps(5-enolpyruvlshimimate-3-phosphate synthase)基因是美國(guó)孟山都公司開(kāi)發(fā)的轉(zhuǎn)基因大豆中抗草甘膦的靶基因，它與莽草酸途徑密切相關(guān)。自從轉(zhuǎn)基因問(wèn)世以來(lái)，轉(zhuǎn)基因作物種類(lèi)不斷增加，導(dǎo)致人們對(duì)轉(zhuǎn)基因的安全，特別是轉(zhuǎn)基因食品的安全越來(lái)越擔(dān)心，因此世界各國(guó)都對(duì)轉(zhuǎn)基因食品的溯源和標(biāo)識(shí)越來(lái)越關(guān)注。
　　 有相關(guān)報(bào)道證明，轉(zhuǎn)基因外源成分在食品加工過(guò)程中受到各種不同的加工因素的影響。因此，本文采用PC

2、R、蛋白質(zhì)印跡的方法進(jìn)一步研究大豆中epsps成分在儲(chǔ)藏、加工過(guò)程的變化。
　　 試驗(yàn)一轉(zhuǎn)基因大豆粉在真空和普通環(huán)境(4℃、25℃、37℃)的條件下儲(chǔ)藏一段時(shí)間(10、30、50、70、90 d)后，分析其外源epsps成分的變化情況。結(jié)果顯示，真空包裝的大豆粉中轉(zhuǎn)基因蛋白有輕微降解，核酸基本沒(méi)有變化;普通包裝樣品，25℃儲(chǔ)藏的大豆粉的基因和蛋白在50天時(shí)發(fā)生明顯降解，37℃時(shí)發(fā)生降解的情況稍微延遲。在整個(gè)過(guò)程中，蛋白檢測(cè)結(jié)果顯

3、示，穩(wěn)定性:外源蛋白的中間和羧基端＞氨基末端;核酸檢測(cè)結(jié)果顯示，穩(wěn)定性:35S啟動(dòng)子＜nos終止子和epsps(517-854區(qū)間)。結(jié)合兩種儲(chǔ)藏環(huán)境，對(duì)比結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，在儲(chǔ)藏過(guò)程中，對(duì)epsps基因和蛋白的影響:濕度＞溫度。
　　 試驗(yàn)二大豆分離蛋白作為肉品中重要添加劑之一，存不存在轉(zhuǎn)基因成分與功能食品和肉制品密切相關(guān)。因此，本試驗(yàn)通過(guò)試驗(yàn)一建立的方法對(duì)江蘇周邊地方市售的大豆分離蛋白進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)在所檢測(cè)的5個(gè)城大豆分離蛋白中

4、至少有2種以上的大豆分離蛋白存在轉(zhuǎn)基因成分。試驗(yàn)結(jié)果表明，市售的轉(zhuǎn)基因大豆分離蛋白中，DC-16抗體所對(duì)應(yīng)的蛋白區(qū)域較為穩(wěn)定(降解條帶為46.5 kD，41.9kD，35.5kD)，核酸1111-1429bp之間的序列穩(wěn)定性較好，且半定量檢測(cè)靈敏度較高。
　　 試驗(yàn)三為了進(jìn)一步研究大豆分離蛋白在整個(gè)肉品加工過(guò)程中的變化過(guò)程，本試驗(yàn)采用河南安陽(yáng)生產(chǎn)的轉(zhuǎn)基因大豆分離蛋白按8％的質(zhì)量比添加到香腸中，并分步（腌制、烘烤、蒸煮、滅菌）取樣

5、，研究轉(zhuǎn)基因大豆分離蛋白在加工香腸中的變化情況。研究發(fā)現(xiàn)，加工過(guò)程中的不同的加工條件對(duì)大豆分離蛋白的純度以及Western-Blot技術(shù)局限性的存在影響，且轉(zhuǎn)基因大豆分離蛋白在肉制品中最低的含量檢測(cè)限為2％(wt/wt)。同時(shí)經(jīng)過(guò)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在試驗(yàn)二中能夠檢測(cè)到的降解條帶在加工過(guò)程中由于使用量和加工因素的影響，難以用Western-Blot的方法檢測(cè)，同時(shí)對(duì)比三個(gè)抗體可以發(fā)現(xiàn)，DC-17抗體和CK-17抗體檢測(cè)靈敏度較高，在整個(gè)加工過(guò)程中