?？麖娦碾陌l(fā)酵工藝與臨床前毒理學(xué)研究.pdf

1、?？?Anthopleura)，屬腔腸動物門(Soelenterata)，珊瑚綱(Anthozoa)。在長期的生物進化過程中，為了抵御敵害及捕獲食物，海葵觸手的刺絲囊能夠分泌多種毒素，這些毒素大部分是多肽類毒素，對人和動物有多種活性作用。
　　 海葵毒素能專一地和興奮組織(如神經(jīng)、心肌、骨骼肌)細(xì)胞膜上電壓依賴Na+通道結(jié)合，增強心肌的收縮，所以又稱這類海葵毒素為?？麖娦碾?。因此，研究?？麖娦碾模瑢υO(shè)計、開發(fā)抗心衰藥物有一定的意

2、義。
　　 在實驗室前期的研究中，已經(jīng)利用基因工程手段，構(gòu)建了海葵強心肽(Cardiactide)基因HK2a的融合表達質(zhì)粒pTRX-HK2a，海葵強心肽基因在原核表達系統(tǒng)大腸桿菌中獲得了高效的可溶表達。本文在本實驗室以前研究的基礎(chǔ)上，進行了Cardiactide在大腸桿菌表達體系中發(fā)酵條件的摸索，優(yōu)化了發(fā)酵條件，在菌體密度OD600值達到20左右時，用200uMIPTG連續(xù)誘導(dǎo)8小時后，可得到濕重菌體60g/L，基本滿足中試生

3、產(chǎn)的需要。
　　 在中試發(fā)酵工藝確定的基礎(chǔ)上，對?？麖娦碾倪M行了較為系統(tǒng)的毒理學(xué)研究。通過急性毒性試驗，測定Cardiactide對大鼠LD50值為1618ug/kg，據(jù)此，Cardiactide屬于高毒物質(zhì)；在Cardiactide對大鼠長期毒性試驗中，通過測定血液學(xué)指標(biāo)、血液生化學(xué)指標(biāo)并結(jié)合病理組織學(xué)切片觀察，發(fā)現(xiàn)?？麖娦碾脑谶B續(xù)靜脈注射2周后，對大鼠的心臟和肝臟均有不同程度的損傷，但在停藥2周后，心臟和肝臟的損傷均得到不同