?？麖?qiáng)心肽發(fā)酵工藝與臨床前毒理學(xué)研究.pdf

1、?？?Anthopleura)，屬腔腸動(dòng)物門(Soelenterata)，珊瑚綱(Anthozoa)。在長期的生物進(jìn)化過程中，為了抵御敵害及捕獲食物，?？|手的刺絲囊能夠分泌多種毒素，這些毒素大部分是多肽類毒素，對(duì)人和動(dòng)物有多種活性作用。
　　 ?？舅啬軐Ｒ坏睾团d奮組織(如神經(jīng)、心肌、骨骼肌)細(xì)胞膜上電壓依賴Na+通道結(jié)合，增強(qiáng)心肌的收縮，所以又稱這類海葵毒素為?？麖?qiáng)心肽。因此，研究?？麖?qiáng)心肽，對(duì)設(shè)計(jì)、開發(fā)抗心衰藥物有一定的意

2、義。
　　 在實(shí)驗(yàn)室前期的研究中，已經(jīng)利用基因工程手段，構(gòu)建了海葵強(qiáng)心肽(Cardiactide)基因HK2a的融合表達(dá)質(zhì)粒pTRX-HK2a，海葵強(qiáng)心肽基因在原核表達(dá)系統(tǒng)大腸桿菌中獲得了高效的可溶表達(dá)。本文在本實(shí)驗(yàn)室以前研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了Cardiactide在大腸桿菌表達(dá)體系中發(fā)酵條件的摸索，優(yōu)化了發(fā)酵條件，在菌體密度OD600值達(dá)到20左右時(shí)，用200uMIPTG連續(xù)誘導(dǎo)8小時(shí)后，可得到濕重菌體60g/L，基本滿足中試生

3、產(chǎn)的需要。
　　 在中試發(fā)酵工藝確定的基礎(chǔ)上，對(duì)?？麖?qiáng)心肽進(jìn)行了較為系統(tǒng)的毒理學(xué)研究。通過急性毒性試驗(yàn)，測定Cardiactide對(duì)大鼠LD50值為1618ug/kg，據(jù)此，Cardiactide屬于高毒物質(zhì)；在Cardiactide對(duì)大鼠長期毒性試驗(yàn)中，通過測定血液學(xué)指標(biāo)、血液生化學(xué)指標(biāo)并結(jié)合病理組織學(xué)切片觀察，發(fā)現(xiàn)?？麖?qiáng)心肽在連續(xù)靜脈注射2周后，對(duì)大鼠的心臟和肝臟均有不同程度的損傷，但在停藥2周后，心臟和肝臟的損傷均得到不同