葉酸修飾的新型隱形泡囊的制備及其體外性質(zhì)研究.pdf

1、目的：泡囊穩(wěn)定性高，生物相容性好，毒性低，表面可進行靶向性修飾，包載抗癌藥后可高效低毒治療癌癥。利用泡囊的這些特點，結(jié)合葉酸主動靶向給藥系統(tǒng)對癌細胞表面過度表達葉酸受體的特異性作用，可定向傳輸藥物至癌細胞發(fā)揮藥效，本文采用自制載體材料，分別以親水性藥物去甲斑蝥素與親脂性藥物脫鹽阿霉素為模型藥物，制備葉酸修飾隱形泡囊（Fa-nios），并對其包裹不同性質(zhì)藥物的理化特性及體外藥效學(xué)進行評價。
　　方法：
　　（1）合成泊洛沙姆

2、P407-膽固醇（P407-Chol）與葉酸-PEG4000-膽固醇（Fa-PEG-Chol）作載體材料，并經(jīng)紅外光譜、X-射線、差示熱分析、核磁共振等方法，表征它們的結(jié)構(gòu)及其反應(yīng)效率；通過溶血性試驗驗證其安全性；
　　（2）以去甲斑蝥素或阿霉素為模型藥物，用上述載體材料以改良注入法制備葉酸泡囊，以單因素考察法優(yōu)化泡囊的處方及其制備工藝（用包封率和粒徑作為評價指標）；
　　（3）通過透射電鏡觀察、測定粒徑、粒徑分布、表面水化

3、層厚度、包封率等，表征葉酸泡囊，并在模擬癌細胞環(huán)境（pH5.0）和正常細胞環(huán)境（pH7.4）下，以透析法考察葉酸泡囊的體外釋放特性；
　?。?）為考察葉酸泡囊的抗癌作用特性，以葉酸受體過度表達的人源性宮頸癌細胞Hela細胞為體外腫瘤細胞模型，采用細胞攝取定量測定實驗考察葉酸泡囊對于Hela細胞的主動靶向性，并使用流式細胞凋亡術(shù)研究葉酸泡囊導(dǎo)致細胞壞死的途徑，進一步采用細胞毒性試驗（MTT法）考察細胞毒性；
　　（5）為考察葉

4、酸泡囊的抗癌作用機理，掌握其進入細胞的過程，以Hela細胞為模型，使用流式細胞術(shù)定量定性的考察包裹兩種不同性質(zhì)藥物的泡囊對于Hela細胞的親和性，并通過考察葉酸泡囊內(nèi)吞蛋白抑制劑、溫度、藥物濃度作用時間等對進入癌細胞藥量的影響，并以熒光顯微鏡適時觀察作用過程，評價葉酸泡囊的細胞吸收情況。
　　結(jié)果：
　　（1）合成的泊洛沙姆P407-膽固醇和葉酸-PEG4000-膽固醇的結(jié)構(gòu)均得到紅外，1HNMR等的證實，溶血性試驗結(jié)果無溶

5、血現(xiàn)象，證實較為安全。
　　（2）通過單因素考察實驗，篩選出最優(yōu)處方和工藝的葉酸修飾去甲斑蝥素隱形泡囊和葉酸修飾阿霉素隱形泡囊。
　　（3）葉酸修飾去甲斑蝥素隱形泡囊和葉酸修飾阿霉素隱形泡囊的粒徑分別為（100.87±0.23）nm和（211.25±8.75）nm；表面水化層厚度為1.63nm和1.72nm，可推測葉酸泡囊能規(guī)避吞噬，能滿足體內(nèi)長循環(huán)要求；包封率分別為（52.3±2.16）%和（96.41±2.65）%；多分

6、散指數(shù)PDI分別為0.176和0.253。透射電鏡顯示葉酸泡囊外觀圓整，粒徑大小均勻。葉酸泡囊的體外釋放速率顯著低于游離藥物（P<0.01），且在正常細胞環(huán)境的釋放速率顯著小于癌細胞環(huán)境（P<0.01）。
　?。?）細胞攝取定量試驗均表明：4h時葉酸泡囊對Hela細胞的親和力比無Fa的隱形泡囊更為顯著（P<0.01）。流式細胞凋亡試驗說明，凋亡是去甲斑蝥素導(dǎo)致細胞壞死的途徑之一，且制成葉酸泡囊后并未改變此種途徑。細胞毒性試驗結(jié)果，

7、分別呈現(xiàn)毒性對作用時間和藥物濃度的依賴性，且毒性大小次序為：葉酸泡囊>隱形泡囊>游離藥物，空白泡囊?guī)缀鯚o毒。
　?。?）流式細胞攝取試驗(FCM)證明了葉酸泡囊的靶向性。內(nèi)吞蛋白抑制劑試驗表明：網(wǎng)格蛋白抑制劑氯丙嗪可有效抑制Hela細胞對藥物的攝取。Hela細胞攝取試驗表明：攝取環(huán)境溫度、藥物濃度、作用時間均會對攝取葉酸泡囊的量產(chǎn)生影響。熒光顯微鏡觀察結(jié)果說明：當藥物用葉酸泡囊包載后更易進入腫瘤細胞及其細胞核。
　　結(jié)論：體