桑黃菌絲體多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定及生物活性研究.pdf

1、桑黃作為一種珍貴的藥用真菌，其杰出的生理功效備受人關(guān)注，尤其是抗腫瘤效果極佳。目前主要是針對(duì)桑黃的子實(shí)體多糖進(jìn)行研究，但其子實(shí)體稀少。固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)菌絲體多糖尚鮮有報(bào)道。本文利用實(shí)驗(yàn)室固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)的桑黃菌絲體，提取純化其中的多糖成分，分析多糖組分的結(jié)構(gòu)，并開(kāi)展一系列的生理活性研究，研究其理化性質(zhì)，為桑黃保健品的規(guī)?；_(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。桑黃菌絲體通過(guò)粉碎過(guò)篩，90℃水浴3h，去除淀粉，除蛋白，醇沉，依次利用DEAE-52，G100純化柱進(jìn)行

2、分離，得到三種不同的多糖組分。對(duì)這三種多糖組分進(jìn)行紫外全波段掃描以及HPLC分析，結(jié)果表明分離所得的三種桑黃多糖Plps-1，Plps-2，Plps-3為均一的組分。通過(guò)凝膠色譜法進(jìn)行測(cè)定可以算出Plps-1的相對(duì)分子量為2.5×105 Da，Plps-2的相對(duì)分子量為1.25×105 Da，Plps-3的相對(duì)分子量為2.8×104 Da。單糖組分分析可以得知，Plps-1中所含單糖比例為阿拉伯糖∶半乳糖∶巖藻糖∶木糖∶葡萄糖=1.33

3、6∶1∶1.182∶1∶21.964。 Plps-2中所含單糖比例為阿拉伯糖∶半乳糖∶甘露糖∶巖藻糖∶木糖∶葡萄糖=3.780∶3.898∶3.372∶1.912∶1∶10.430。Plps-3中所含單糖比例為阿拉伯糖∶半乳糖∶甘露糖∶巖藻糖∶木糖∶葡萄糖=1.552∶2.594∶1.956∶1.466∶1∶14.368。GC分析結(jié)果表明Plps-1中的1→4鍵合的糖基的比例為63.97％，以1→3鍵合的糖基的比例為12.61％，以1→

4、6鍵合的糖基或非還原末端糖基的比例為23.→2％;Plps-2中的1→4鍵合的糖基的比例為61.09％，以1→3鍵合的糖基的比例為14.05％，以1→6鍵合的糖基或非還原末端糖基的比例為24.86％;Plps-3中的1→4鍵合的糖基的比例為11.71％，以1→3鍵合的糖基的比例為46.85％，以1→6鍵合的糖基或非還原末端糖基的比例為41.44％。根據(jù)紅外光譜圖可以看出Plps1和Plps2含有不飽和的-CH，-C=C-，-CH3，-C

5、-O-C，-OH，-NH2，β-糖苷鍵相連的吡喃環(huán)多糖;Plps3含有不飽和的-CH，-C=C-，-C-O-C，=CH2，-OH,-CH3，-C=O，既含有α-糖苷鍵也含有β-糖苷鍵的吡喃環(huán)多糖。
　　 本研究表明，三種桑黃多糖組分的還原力的測(cè)定以及對(duì)羥自由基清除的實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明三中桑黃多糖組分都有一定抗氧化效果，但不具有顯著性。Plps-1能夠抑制S180的體外增殖，抑制率高達(dá)93.6％; Annexin V-FITC/PI細(xì)

6、胞周期以及細(xì)胞凋亡效果實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步證明Plps-1能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡，使其停止在G1期。通過(guò)測(cè)定細(xì)胞因子TNF-α的含量發(fā)現(xiàn)，三種桑黃多糖均可一定程度地抑制TNF-α的產(chǎn)生，表明桑黃多糖在抗腫瘤方面沒(méi)有毒副作用。在脾細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，可以發(fā)現(xiàn)三種桑黃多糖都能夠極為顯著地增強(qiáng)其活力，呈現(xiàn)一定的劑量關(guān)系。其中在添加濃度為200μg/mL時(shí)Plps-1、Plps-2、Plps-3可分別能夠提高脾細(xì)胞活力4180.538％、6843.064％;5

7、42.6471％。在胸腺細(xì)胞體外增殖實(shí)驗(yàn)中，也可發(fā)現(xiàn)兩種桑黃多糖Plps-1和Plps-2都能夠極為顯著地增強(qiáng)其活力。其中Plps-1在100μg/mL時(shí)能夠提高13232.7％;Plps-2在200μg/mL時(shí)能夠提高11215.8％; Plps-3在1OOμg/mL時(shí)能夠提高32.967％但不具有顯著性。在巨噬細(xì)胞吞噬中性紅實(shí)驗(yàn)中，只有Plps-1能夠顯著性的提高其吞噬能力，在200μg/mL時(shí)的Plps-1能夠提高吞噬能力54.6